肿瘤微环境pH响应型可断裂PEG化透明质酸环糊精纳米给药系统的构建及评价

发布时间：2023-05-31 22:55

　　透明质酸既可以作为载体材料又可以作为多种肿瘤细胞高表达的CD44受体的天然主动靶向配体,具有稳定性好、非免疫原性、生物相容性高、生物可降解等优良的理化性质和生物学性质。但其在体内受体分布广泛,使得透明质酸靶向纳米制剂在体内易于被肝脾所吞噬,造成其在体内的不良分布和快速清除,从而导致较差的靶向效率。对透明质酸靶向药物传递系统进行PEG化修饰,能够避免其被网状内皮系统吞噬,延长纳米粒的体内循环时间,促进纳米粒在肿瘤部位的蓄积,从而提高靶向效率,是解决上述问题的有效策略。然而,PEG化存在着抑制细胞摄取和阻碍纳米粒溶酶体逃逸的困境。因而本课题设计构建了肿瘤微环境pH响应型可断裂PEG化透明质酸环糊精纳米制剂,以期在体循环中能够最大程度发挥PEG化的优势,而在肿瘤微环境酸性条件下能够快速脱去PEG水化层,提高纳米制剂的主动靶向效率和抗肿瘤疗效。首先,通过透明质酸聚合物上的羧基基团和羟丙基-β-环糊精的羟基基团之间发生酯化反应,制备三种不同分子量的透明质酸-羟丙基-β-环糊精主动靶向接枝物(HA-CDs,分子量为7,63,102 kDa),并通过核磁和红外技术对其结构进行确证。然后,合成芳香亚胺...

【文章页数】：104 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略语表
前言
第一章 透明质酸羟丙基-β-环糊精接枝物和金刚烷化聚乙二醇的合成及表征
    第一节 不同分子量透明质酸羟丙基-β-环糊精接枝物的合成
        1 材料与仪器
            1.1 材料
            1.2 仪器
        2 实验方法
            2.1 透明质酸羟丙基-β-环糊精接枝物(HA-CD)的合成
            2.2 接枝物的结构确证
        3 结果与讨论
            3.1 透明质酸羟丙基-β-环糊精接枝物(HA-CD)的合成
            3.2 透明质酸羟丙基-β-环糊精接枝物(HA-CD)的结构确证
    第二节 金刚烷化聚乙二醇的合成及表征
        1 材料与仪器
            1.1 材料
            1.2 仪器
        2 实验方法
            2.1 非酸敏感的金刚烷化聚乙二醇(AD-O-PEG)的合成
            2.2 酸敏感的金刚烷化聚乙二醇(AD-B-PEG)的合成
            2.3 聚合物化学结构及酸敏感性质表征
        3 结果与讨论
            3.1 金刚烷化聚乙二醇的合成
            3.2 金刚烷化聚乙二醇的核磁结构确证
            3.3 聚合物的酸敏感性质表征
    4 本章小结
第二章 透明质酸分子量对透明质酸环糊精纳米粒主动靶向作用的影响
    第一节 透明质酸环糊精主动靶向纳米粒的制备及表征
        1 材料与仪器
            1.1 材料
            1.2 仪器
        2 实验方法
            2.1 透明质酸环糊精主动靶向纳米粒的制备
            2.2 粒径、PDI及Zeta电位测定
            2.3 形态观察
            2.4 包封率和载药量
            2.5 体外释放行为考察
        3 结果与讨论
            3.1 透明质酸环糊精主动靶向纳米粒的制备
            3.2 透明质酸环糊精主动靶向纳米粒的物理化学和制剂学性质表征
            3.3 透明质酸环糊精主动靶向纳米粒的形态观察
            3.4 透明质酸环糊精主动靶向纳米粒的稳定性考察
            3.5 透明质酸环糊精主动靶向纳米粒的体外释放行为
    第二节 透明质酸分子量对主动靶向纳米粒靶向作用的影响
        1 材料与仪器
            1.1 材料
            1.2 仪器
            1.3 细胞及动物
        2 实验方法
            2.1 试液的配制
            2.2 细胞培养
            2.3 CD44受体在肿瘤细胞中的表达
            2.4 MTT法测定细胞毒性
            2.5 细胞摄取
            2.6 细胞摄取机制考察
            2.7 靶向纳米制剂对细胞亲和力的考察
            2.8 靶向纳米制剂对受体的影响
        3 结果与讨论
            3.1 CD44受体在肿瘤细胞中的表达
            3.2 透明质酸环糊精靶向纳米制剂的细胞毒考察
            3.3 透明质酸环糊精靶向纳米制剂的细胞摄取
            3.4 透明质酸环糊精靶向纳米制剂的细胞摄取机制
            3.5 透明质酸环糊精靶向纳米制剂对CD44受体的亲和力
            3.6 透明质酸环糊精靶向纳米制剂对CD44受体分布及存在形式的影响
    4 本章小结
第三章 酸敏感PEG化透明质酸环糊精纳米粒的体外抗肿瘤活性
    第一节 酸敏感PEG化透明质酸环糊精纳米粒的制备及表征
        1 材料与仪器
            1.1 材料
            1.2 仪器
        2 实验方法
            2.1 PEG化透明质酸环糊精主动靶向纳米粒的制备
            2.2 粒径、PDI及Zeta电位测定
            2.3 形态观察
            2.4 包封率和载药量
            2.5 体外释放行为考察
        3 结果与讨论
            3.1 酸敏感PEG化透明质酸环糊精主动靶向纳米粒的构建
            3.2 PEG化透明质酸环糊精主动靶向纳米粒的物理化学和制剂学性质表征
            3.3 PEG化透明质酸环糊精主动靶向纳米粒的形态观察
            3.4 PEG化透明质酸环糊精主动靶向纳米粒的稳定性考察
            3.5 PEG化透明质酸环糊精主动靶向纳米粒的体外释放行为
    第二节 酸敏感PEG化透明质酸环糊精纳米粒的体外抗肿瘤活性
        1 材料与仪器
            1.1 材料
            1.2 仪器
            1.3 细胞来源
        2 实验方法
            2.1 试液的配制
            2.2 细胞培养
            2.3 MTT法测定细胞毒性
            2.4 细胞摄取
            2.5 细胞摄取机制考察
            2.6 共聚焦观察纳米制剂的内涵体/溶酶体逃逸
        3 结果与讨论
            3.1 酸敏感PEG化透明质酸环糊精纳米粒的细胞毒
            3.2 酸敏感PEG化透明质酸环糊精纳米粒的细胞摄取
            3.3 酸敏感PEG化透明质酸环糊精纳米粒的细胞摄取机制
            3.4 酸敏感PEG化透明质酸环糊精纳米粒的溶酶体逃逸能力
    4 本章小结
第四章 酸敏感PEG化透明质酸环糊精纳米制剂的体内药动学和荷瘤小鼠组织分布
    第一节 酸敏感PEG化透明质酸环糊精纳米制剂的体内药动学
        1 材料与仪器
            1.1 材料
            1.2 仪器
            1.3 动物
        2 实验方法
            2.1 分析方法
            2.2 溶液的配制
            2.3 给药方案和样品采集
            2.4 血浆样品预处理
            2.5 数据处理
        3 结果与讨论
            3.1 血药浓度-时间曲线比较
            3.2 药动学参数计算
    第二节 酸敏感PEG化透明质酸环糊精纳米制剂的荷瘤小鼠体内组织分布
        1 材料与仪器
            1.1 材料
            1.2 仪器
            1.3 细胞及动物
        2 实验方法
            2.1 4T1细胞的培养
            2.2 4T1荷瘤小鼠模型的建立
            2.3 4T1细胞及组织水平的CD44受体表达
            2.4 载DiR的PEG化透明质酸环糊精纳米粒的制备
            2.5 组织分布实验
        3 结果与讨论
            3.1 4T1细胞及组织水平的CD44受体表达
            3.2 载DiR的PEG化透明质酸环糊精纳米粒在荷瘤小鼠体内组织分布
    4 本章小结
第五章 酸敏感PEG化透明质酸环糊精纳米制剂的体内药效学
    1 材料与仪器
        1.1 材料
        1.2 仪器
        1.3 细胞及动物
    2 实验方法
        2.1 4T1荷瘤小鼠动物模型的建立
        2.2 分组和给药方案
        2.3 药效学评价方法
    3 结果与讨论
        3.1 纳米粒的抗肿瘤效果
        3.2 组织学染色评价
    4 本章小结
全文结论
创新点与不足
参考文献
攻读博士学位期间取得的学术成果
致谢
学位论文自愿预先检测申请表



本文编号：3826166