吡格列酮对高糖诱导的大鼠肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化的影响及机制研究

发布时间：2023-10-03 20:17

　　目的:探讨吡格列酮(PIO)对高糖诱导的大鼠肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化(EMT)的影响及可能机制,为防治糖尿病肾病提供理论依据及新靶点。方法:将大鼠肾小管细胞NRK-52E随机分为对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(30 mmol/L葡萄糖)、PIO干预组(30 mmol/L葡萄糖+5.0μmol/L PIO)、GW9662干预组(30 mmol/L葡萄糖+5.0μmol/L PIO+5.0μmol/L特异性拮抗剂GW9662)。前3组细胞分别在培养6、12、24、48 h时进行动态检测,GW9662干预组细胞在培养48 h时进行检测。采用Realtime PCR法检测细胞中第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源基因(PTEN)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)mRNA的表达水平;采用Western blotting法检测细胞中PTEN、PPARγ、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、上皮钙黏素(E-cadherin)的表达以及磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路的变化。结果:随培养时间的延长,与正常组比较,高糖组细胞中PPARγ、P...

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【文章目录】：
1 材料
    1.1 仪器
    1.2 药品与试剂
    1.3 PCR引物
    1.4 细胞
2 方法
    2.1 细胞培养和药物母液制备
    2.2 MTT法检测PIO对NRK-52E细胞活性的影响
    2.3 细胞分组与处理
    2.4 Real-time PCR法检测NRK-52E细胞中PPARγ、PTEN m RNA的表达水平
    2.5 Western blotting法检测NRK-52E细胞中PPARγ、PTEN、E-cadherin、α-SMA、p-AKT(Thr308）蛋白的表达水平
    2.6 统计学方法
3 结果
    3.1 不同浓度PIO对NRK-52E细胞活性的影响
    3.2 不同条件下NRK-52E细胞中相应因子的mRNA及蛋白表达的动态变化
        3.2.1 mRNA表达的动态变化
        3.2.2 蛋白表达的动态变化
    3.3 PIO和PPARγ拮抗剂GW9662对高糖条件下NRK-52E细胞中相应因子的m RNA及蛋白表达的影响
        3.3.1对m RNA表达的影响
        3.3.2 对蛋白表达的影响
4 讨论



本文编号：3850572