铅镉联合暴露导致的神经毒性及HDAC2在其中的调控作用

发布时间：2023-10-06 09:02

　　食品重金属污染威胁着食品安全,铅和镉是食品中重金属污染的主要成分。已有研究表明铅和镉的单独暴露均会损伤发育期儿童的学习记忆,其损伤机制涉及多方面。铅和镉的联合暴露导致的神经毒性以及可能的表观遗传调控机制尚不清楚。研究铅镉联合暴露的神经毒性,有助于明确某些食品中铅和镉的安全限量标准,具有重要的科学意义和应用价值。本课题旨在探究铅镉联合暴露导致的神经毒性及其中可能表观调控机制,主要包括下结果:1.铅镉单独暴露和联合暴露对PC12细胞存活率和突起生长的影响。实验采用醋酸铅和氯化镉,以浓度为2.5、5、10、20μM的铅和0.1、0.2、0.4、0.8μM的镉处理PC12细胞,并用MTT比色法检测细胞存活率,Image J software统计细胞分支长度和数量。结果发现,铅和镉单独暴露均降低细胞存活率,且抑制了PC12细胞的突起生长,且对细胞存活率降低和突起生长的抑制作用呈剂量依赖性,铅镉联合暴露加重了对细胞存活率的降低,并加重了对细胞突起生长的抑制。2.铅镉单独暴露和联合暴露对Sprague Dawley(SD)大鼠学习记忆和海马CA1和DG区神经元树突棘密度的影响。SD大鼠从出生第一天开...

【文章页数】：82 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
致谢
摘要
Abstract
第一章 绪论
    1.1 食品中铅和镉的污染现状
        1.1.1 食品中铅的污染现状
        1.1.2 食品中镉的污染现状
    1.2 铅和镉的神经毒性及可能机制
        1.2.1 铅的神经毒性
        1.2.2 铅的神经毒性的可能机制
        1.2.3 镉的神经毒性
        1.2.4 镉的神经毒性的可能机制
    1.3 表观遗传学
        1.3.1 表观遗传学涉及的机制
        1.3.2 表观遗传学的研究方法
    1.4 海马与学习记忆
    1.5 树突棘和学习记忆
        1.5.1 树突棘与树突
        1.5.2 树突棘与突触
        1.5.3 树突棘与学习记忆
        1.5.4 树突棘的调节机制
    1.6 课题研究的背景、意义和主要内容
        1.6.1 课题研究的背景、意义
        1.6.2 课题研究的主要内容
第二章 铅镉单独暴露和联合暴露对PC12细胞存活率和突起生长的影响
    2.1 实验材料
        2.1.1 主要仪器
        2.1.2 主要试剂和药品
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 细胞存活率检测
        2.2.3 细胞突起检测
    2.3 数据分析
    2.4 实验结果
        2.4.1 铅和镉单独暴露对PC12细胞存活率的影响
        2.4.2 铅和镉联合暴露对PC12细胞存活率的影响
        2.4.3 铅和镉单独暴露对PC12细胞突起生长的影响
        2.4.4 铅和镉联合暴露对PC12细胞突起生长的影响
    2.5 讨论与小结
        2.5.1 讨论
        2.5.2 小结
第三章 铅和镉联合暴露对SD大鼠学习记忆和海马区树突棘密度的影响
    3.1 实验材料
        3.1.1 主要仪器
        3.1.2 主要试剂和药品
    3.2 实验方法
        3.2.1 实验动物
        3.2.2 Morris水迷宫实验
        3.2.3 Y迷宫实验
        3.2.4 高尔基染色实验（Golgi -COX）
    3.3 数据分析
    3.4 实验结果
        3.4.1 铅镉联合暴露对SD大鼠学习记忆的影响
        3.4.2 铅镉联合暴露对SD大鼠海马区树突棘密度的影响
    3.5 讨论与小结
        3.5.1 讨论
        3.5.2 小结
第四章 铅镉联合暴露对HDAC2表达的影响
    4.1 实验材料
        4.1.1 主要仪器
        4.1.2 主要试剂和药品
        4.1.3 主要抗体
        4.1.4 相关引物
    4.2 实验方法
        4.2.1 PC12细胞复苏和培养
        4.2.2 蛋白样品的制备
        4.2.3 BCA法测蛋白浓度
        4.2.4 蛋白质免疫印迹法（Western Blot）
        4.2.5 细胞中总RNA提取
        4.2.6 反转录
        4.2.7 聚合酶链式反应
        4.2.8 琼脂糖凝胶电泳
        4.2.9 荧光定量聚合酶链式反应
    4.3 数据分析
    4.4 实验结果
        4.4.1 铅镉联合暴露对PC12细胞中HDAC2表达的影响
        4.4.2 铅镉联合暴露对海马组织中HDAC2表达的影响
    4.5 讨论与小结
        4.5.1 讨论
        4.5.2 小结
第五章 HDAC2在铅镉联合暴露导致神经毒性中的调节作用
    5.1 实验材料
        5.1.1 主要仪器
        5.1.2 主要试剂和药品
    5.2 实验方法
        5.2.1 PC12细胞复苏和培养
        5.2.2 大肠杆菌的培养
        5.2.3 质粒提取方法
        5.2.4 Lipofectamine 3000脂质体转染实验
        5.2.5 细胞突起检测
    5.3 数据处理
    5.4 实验结果
        5.4.1 TSA处理对铅镉联合暴露的细胞突起生长的影响
        5.4.2 shHDAC2处理对铅镉联合暴露的细胞突起生长的影响
    5.5 讨论和小结
        5.5.1 讨论
        5.5.2 小结
第六章 结论
    6.1 概述
    6.2 主要结论
    6.3 创新点
    6.4 展望
参考文献
硕士期间的学术活动及研究成果



本文编号：3851546