阿霉素通过上调Klf-4影响骨肉瘤肿瘤干细胞特性及转移作用研究
发布时间：2024-01-27 12:04
研究背景：骨肉瘤(Osteosarcoma)源于间叶组织,是以能产生骨样组织的梭形基质细胞为特征的恶性肿瘤,是原发性恶性骨肿瘤中最常见、恶性程度最高的一类骨肿瘤,好发于儿童和青少年期。在手术切除的基础上辅助阿霉素(Adriamycin, ADR)药物为主的联合化疗是目前临床主要治疗手段。尽管新型辅助化疗的应用极大地提高了骨肉瘤患者的5年存活率,但是骨肉瘤患者的预后一直很差,长期生存率仍徘徊不前。骨肉瘤易复发、易转移及患者对包括阿霉素在内的化疗药物产生原发或继发性耐药是目前导致临床化疗失败的主要原因。根据肿瘤干细胞理论,骨肉瘤肿瘤干细胞具有自我更新、强致瘤性、多向分化潜能、产生异质性肿瘤细胞及多重耐药性的生物学特征,因此骨肉瘤肿瘤干细胞的存在可能是临床化疗失败的关键原因之一。如果可以特异性的针对骨肉瘤肿瘤干细胞,尤其是化疗作用下骨肉瘤肿瘤干细胞相关特性的改变,可为深入认识骨肉瘤的发生发展提供新方向,并以此为基础寻找和发现靶向骨肉瘤肿瘤干细胞的药物,对于骨肉瘤的最终治愈具有不可估量的前景和价值。本论文通过考察一线化疗药物阿霉素对骨肉瘤肿瘤干细胞特性和转移能力的影响,发现人类Kruppel样...
【文章页数】：148 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
致谢
中文摘要
Abstract
目次
绪论
第一部分 阿霉素影响骨肉瘤肿瘤干细胞特性及转移能力的作用及机制研究
1.1 引言
1.2 实验材料与仪器
1.2.1 细胞株和病人原代样本
1.2.2 质粒
1.2.3 药物与主要试剂
1.2.5 实验仪器与主要材料
1.3 实验方法
1.3.1 细胞培养
1.3.2 SRB法检测
1.3.3 流式细胞术检测骨肉瘤细胞表面抗原CD133表达情况
1.3.4 干细胞球的培养
1.3.5 Real-time PCR测定细胞相关基因表达水平的变化
1.3.6 细胞划痕修复实验
1.3.7 Transwell小室细胞迁移实验
1.3.8 Western Blotting检测相关蛋白表达水平
1.3.9 SiRNA技术沉默骨肉瘤KHOS/NP细胞的Klf-4
1.3.10 慢病毒的包装、滴度测定及靶细胞转染
1.3.11 数据分析
1.4 实验结果
1.4.1 ADR对骨肉瘤肿瘤干细胞特性的影响
1.4.2 ADR对骨肉瘤细胞转移能力的影响
1.4.3 ADR对干细胞转录因子的影响
1.4.4 Klf-4对ADR促进的骨肉瘤肿瘤干细胞特性的影响
1.4.5 Klf-4对ADR促进的骨肉瘤细胞转移能力的影响
1.5 讨论
第二部分 Klf-4调控骨肉瘤脾瘤干细胞特性及转移能力的作用研究
2.1 引言
2.2 实验材料与仪器
2.2.1 细胞株
2.2.2 质粒
2.2.3 药物与主要试剂
2.2.4 实验动物
2.2.5 实验仪器及主要材料
2.3 实验方法
2.3.1 细胞培养
2.3.2 台盼蓝拒染法检测细胞增殖活性
2.3.3 干细胞球的培养
2.3.4 细胞周期和凋亡检测
2.3.5 细胞划痕修复实验
2.3.6 Transwell小室细胞迁移实验
2.3.7 Western Blotting检测相关蛋白表达水平
2.3.8 SRB法检测
2.3.9 qRT-PCR测定相关基因表达水平的变化
2.3.10 质粒转化
2.3.11 慢病毒的包装、滴度测定及靶细胞转染
2.3.12 SiRNA技术沉默骨肉瘤KHOS/NP细胞的Klf-4和p38
2.3.13 软琼脂糖克隆形成实验
2.3.14 裸小鼠异位移植瘤模型评价骨肉瘤细胞成瘤能力
2.3.15 基因芯片分析
2.3.16 数据分析
2.4 实验结果
2.4.1 Klf-4在不同骨肉瘤细胞中的表达情况
2.4.2 Klf-4的蛋白对骨肉瘤肿瘤干细胞特性的影响
2.4.3 Klf-4的蛋白对骨肉瘤细胞周期和增殖能力的影响
2.4.4 Klf-4的蛋白对骨肉瘤细胞化疗敏感性的影响
2.4.5 Klf-4的蛋白表达对骨肉瘤细胞转移能力的影响
2.4.6 p38 MAPK信号通路对Klf-4调控的骨肉瘤肿瘤干细胞特性的影响
2.5 讨论
第三部分 辛伐他汀通过抑制Klf-4蛋白拮抗ADR促进的骨肉瘤肿瘤干细胞特性
3.1 引言
3.2 实验材料与仪器
3.2.1 细胞株
3.2.2 质粒
3.2.3 药物与主要试剂
3.2.4 实验动物
3.2.5 实验仪器与主要材料
3.3 实验方法
3.3.1 细胞培养
3.3.2 流式细胞术检测骨肉瘤细胞表面抗原CD133表达情况
3.3.3 干细胞球培养
3.3.4 Real-time PCR测定细胞相关基因表达水平的变化
3.3.5 细胞划痕修复实验
3.3.6 Transwell小室细胞迁移实验
3.3.7 Western Blotting检测相关蛋白表达水平
3.3.8 慢病毒包装、滴度测定及靶细胞转染
3.3.9 裸小鼠异位移植瘤模型评价骨肉瘤细胞成瘤能力
3.3.10 免疫组化
3.3.11 移植瘤的免疫荧光染色
3.3.12 数据分析
3.4 实验结果
3.4.1 他汀类药物可以抑制Klf-4蛋白进而影响细胞sphere形成能力
3.4.2 辛伐他汀药物可以拮抗ADR促进的骨肉瘤肿瘤干细胞特性
3.4.3 辛伐他汀药物可以拮抗ADR促进的骨肉瘤细胞转移能力
3.4.4 辛伐他汀通过抑制Klf-4拮抗ADR所促进的骨肉瘤细胞成瘤性
3.5 讨论
参考文献
综述 肿瘤干细胞研究进展
参考文献
作者简历及在学期间所获得的科研成果
本文编号：3886934
【文章页数】：148 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
致谢
中文摘要
Abstract
目次
绪论
第一部分 阿霉素影响骨肉瘤肿瘤干细胞特性及转移能力的作用及机制研究
1.1 引言
1.2 实验材料与仪器
1.2.1 细胞株和病人原代样本
1.2.2 质粒
1.2.3 药物与主要试剂
1.2.5 实验仪器与主要材料
1.3 实验方法
1.3.1 细胞培养
1.3.2 SRB法检测
1.3.3 流式细胞术检测骨肉瘤细胞表面抗原CD133表达情况
1.3.4 干细胞球的培养
1.3.5 Real-time PCR测定细胞相关基因表达水平的变化
1.3.6 细胞划痕修复实验
1.3.7 Transwell小室细胞迁移实验
1.3.8 Western Blotting检测相关蛋白表达水平
1.3.9 SiRNA技术沉默骨肉瘤KHOS/NP细胞的Klf-4
1.3.10 慢病毒的包装、滴度测定及靶细胞转染
1.3.11 数据分析
1.4 实验结果
1.4.1 ADR对骨肉瘤肿瘤干细胞特性的影响
1.4.2 ADR对骨肉瘤细胞转移能力的影响
1.4.3 ADR对干细胞转录因子的影响
1.4.4 Klf-4对ADR促进的骨肉瘤肿瘤干细胞特性的影响
1.4.5 Klf-4对ADR促进的骨肉瘤细胞转移能力的影响
1.5 讨论
第二部分 Klf-4调控骨肉瘤脾瘤干细胞特性及转移能力的作用研究
2.1 引言
2.2 实验材料与仪器
2.2.1 细胞株
2.2.2 质粒
2.2.3 药物与主要试剂
2.2.4 实验动物
2.2.5 实验仪器及主要材料
2.3 实验方法
2.3.1 细胞培养
2.3.2 台盼蓝拒染法检测细胞增殖活性
2.3.3 干细胞球的培养
2.3.4 细胞周期和凋亡检测
2.3.5 细胞划痕修复实验
2.3.6 Transwell小室细胞迁移实验
2.3.7 Western Blotting检测相关蛋白表达水平
2.3.8 SRB法检测
2.3.9 qRT-PCR测定相关基因表达水平的变化
2.3.10 质粒转化
2.3.11 慢病毒的包装、滴度测定及靶细胞转染
2.3.12 SiRNA技术沉默骨肉瘤KHOS/NP细胞的Klf-4和p38
2.3.13 软琼脂糖克隆形成实验
2.3.14 裸小鼠异位移植瘤模型评价骨肉瘤细胞成瘤能力
2.3.15 基因芯片分析
2.3.16 数据分析
2.4 实验结果
2.4.1 Klf-4在不同骨肉瘤细胞中的表达情况
2.4.2 Klf-4的蛋白对骨肉瘤肿瘤干细胞特性的影响
2.4.3 Klf-4的蛋白对骨肉瘤细胞周期和增殖能力的影响
2.4.4 Klf-4的蛋白对骨肉瘤细胞化疗敏感性的影响
2.4.5 Klf-4的蛋白表达对骨肉瘤细胞转移能力的影响
2.4.6 p38 MAPK信号通路对Klf-4调控的骨肉瘤肿瘤干细胞特性的影响
2.5 讨论
第三部分 辛伐他汀通过抑制Klf-4蛋白拮抗ADR促进的骨肉瘤肿瘤干细胞特性
3.1 引言
3.2 实验材料与仪器
3.2.1 细胞株
3.2.2 质粒
3.2.3 药物与主要试剂
3.2.4 实验动物
3.2.5 实验仪器与主要材料
3.3 实验方法
3.3.1 细胞培养
3.3.2 流式细胞术检测骨肉瘤细胞表面抗原CD133表达情况
3.3.3 干细胞球培养
3.3.4 Real-time PCR测定细胞相关基因表达水平的变化
3.3.5 细胞划痕修复实验
3.3.6 Transwell小室细胞迁移实验
3.3.7 Western Blotting检测相关蛋白表达水平
3.3.8 慢病毒包装、滴度测定及靶细胞转染
3.3.9 裸小鼠异位移植瘤模型评价骨肉瘤细胞成瘤能力
3.3.10 免疫组化
3.3.11 移植瘤的免疫荧光染色
3.3.12 数据分析
3.4 实验结果
3.4.1 他汀类药物可以抑制Klf-4蛋白进而影响细胞sphere形成能力
3.4.2 辛伐他汀药物可以拮抗ADR促进的骨肉瘤肿瘤干细胞特性
3.4.3 辛伐他汀药物可以拮抗ADR促进的骨肉瘤细胞转移能力
3.4.4 辛伐他汀通过抑制Klf-4拮抗ADR所促进的骨肉瘤细胞成瘤性
3.5 讨论
参考文献
综述 肿瘤干细胞研究进展
参考文献
作者简历及在学期间所获得的科研成果
本文编号：3886934
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