Pseudonocardia autotrophica CGMCC 7935生物催化合成1α,25(OH) 2 VD 3
发布时间：2024-02-14 18:19
骨化三醇(1α,25(OH)2VD3)主要适应症有骨质疏松症、特发性和假性及术后甲状旁腺功能低下、肾性骨营养不良等,在老龄化社会具有广阔的市场前景。目前1α,25(OH)2VD3的产量低,导致药物价格昂贵,提高其产量和降低生产成本对减轻用药负担具有重要意义。1α,25(OH)2VD3有化学合成和生物催化两种制备方法,但化学合成法难度大、步骤多、易产生异构体且分离纯化复杂,而生物催化法步骤少、专一性强且条件温和,具有替代化学合成的潜力。本论文对自养假诺卡氏菌Pseudonocardia autotrophica CGMCC 7935将25(OH)VD3转化为1α,25(OH)2VD3的过程进行了研究,考察了全细胞催化体系、游离酶催化体系以及固定化酶催化体系合成1α,25(OH)2VD3的可行性并对工艺参数进行了优化研究。考察全细胞催化体系及其条件优化...
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 绪论
1.1 1α,25(OH)2VD3生理作用及合成方法概述
1.1.1 1α,25(OH)2VD3概述
1.1.2 1α,25(OH)2VD3合成方法概述
1.2 P450酶及单加氧反应途径概述
1.2.1 细胞色素P450概述
1.2.2 氧还原活化途径的电子传递系统
1.2.3 过氧化氢分流反应途径
1.3 包埋固定化P450技术概述
1.4 研究意义与研究内容
2 全细胞催化体系合成1α,25(OH)2VD3
2.1 实验材料
2.1.1 菌株
2.1.2 主要试剂及仪器
2.1.3 培养基及溶液配制
2.2 实验方法
2.2.1 菌株培养
2.2.2 全细胞催化方法
2.2.3 HPLC检测
2.2.4 全细胞催化体系条件优化
2.3 结果与讨论
2.3.1 全细胞催化体系合成1α,25(OH)2VD3实验结果
2.3.2 转化时间对催化的影响
2.3.3 底物溶剂种类对催化的影响
2.3.4 助溶剂对催化的影响
2.3.5 底物与助溶剂比例对催化的影响
2.3.6 金属离子对催化的影响
2.3.7 金属离子浓度对催化的影响
2.3.8 底物浓度对催化的影响
2.4 小结
3 游离酶催化体系过氧化氢分流反应合成1α,25(OH)2VD3
3.1 实验材料
3.1.1 主要试剂及仪器
3.1.2 溶液配制
3.2 实验方法
3.2.1 粗酶液制备方法
3.2.2 CO差异光谱验证方法
3.2.3 游离酶催化体系合成1α,25(OH)2VD3方法
3.2.4 游离酶催化体系条件优化
3.3 结果与讨论
3.3.1 CO差异光谱验证结果
3.3.2 底物体系吐温80的添加对过氧化氢分流反应的影响
3.3.3 助溶剂的添加对过氧化氢分流反应的影响
3.3.4 β-环糊精对过氧化氢分流反应的影响
3.3.5 温度对过氧化氢分流反应的影响
3.3.6 pH对过氧化氢分流反应的影响
3.3.7 H2O2浓度对过氧化氢分流反应的影响
3.3.8 底物浓度对积累量的影响
3.4 小结
4 固定化酶催化体系合成1α,25(OH)2VD3
4.1 实验材料
4.1.1 主要试剂及仪器
4.1.2 溶液配制
4.2 实验方法
4.2.1 海藻酸钙胶粒制备
4.2.2 固定化酶催化过氧化氢分流反应
4.2.3 固定化酶制备优化及性质考察
4.3 结果与讨论
4.3.1 胶粒外观
4.3.2 固定化酶催化结果
4.3.3 海藻酸钠浓度对催化的影响
4.3.4 氯化钙浓度对催化的影响
4.3.5 固定化酶的热稳定性
4.3.6 固定化酶的pH稳定性
4.3.7 H2O2浓度对固定化酶催化的影响
4.4 小结
5 本文结论与展望
5.1 结论
5.2 创新点
5.3 展望
参考文献
攻读硕士学位期间发表论文及科研成果
致谢
综述
参考文献
本文编号：3898394
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 绪论
1.1 1α,25(OH)2VD3生理作用及合成方法概述
1.1.1 1α,25(OH)2VD3概述
1.1.2 1α,25(OH)2VD3合成方法概述
1.2 P450酶及单加氧反应途径概述
1.2.1 细胞色素P450概述
1.2.2 氧还原活化途径的电子传递系统
1.2.3 过氧化氢分流反应途径
1.3 包埋固定化P450技术概述
1.4 研究意义与研究内容
2 全细胞催化体系合成1α,25(OH)2VD3
2.1.1 菌株
2.1.2 主要试剂及仪器
2.1.3 培养基及溶液配制
2.2 实验方法
2.2.1 菌株培养
2.2.2 全细胞催化方法
2.2.3 HPLC检测
2.2.4 全细胞催化体系条件优化
2.3 结果与讨论
2.3.1 全细胞催化体系合成1α,25(OH)2VD3实验结果
2.3.2 转化时间对催化的影响
2.3.3 底物溶剂种类对催化的影响
2.3.4 助溶剂对催化的影响
2.3.5 底物与助溶剂比例对催化的影响
2.3.6 金属离子对催化的影响
2.3.7 金属离子浓度对催化的影响
2.3.8 底物浓度对催化的影响
2.4 小结
3 游离酶催化体系过氧化氢分流反应合成1α,25(OH)2VD3
3.1.1 主要试剂及仪器
3.1.2 溶液配制
3.2 实验方法
3.2.1 粗酶液制备方法
3.2.2 CO差异光谱验证方法
3.2.3 游离酶催化体系合成1α,25(OH)2VD3方法
3.2.4 游离酶催化体系条件优化
3.3 结果与讨论
3.3.1 CO差异光谱验证结果
3.3.2 底物体系吐温80的添加对过氧化氢分流反应的影响
3.3.3 助溶剂的添加对过氧化氢分流反应的影响
3.3.4 β-环糊精对过氧化氢分流反应的影响
3.3.5 温度对过氧化氢分流反应的影响
3.3.6 pH对过氧化氢分流反应的影响
3.3.7 H2O2浓度对过氧化氢分流反应的影响
3.3.8 底物浓度对积累量的影响
3.4 小结
4 固定化酶催化体系合成1α,25(OH)2VD3
4.1.1 主要试剂及仪器
4.1.2 溶液配制
4.2 实验方法
4.2.1 海藻酸钙胶粒制备
4.2.2 固定化酶催化过氧化氢分流反应
4.2.3 固定化酶制备优化及性质考察
4.3 结果与讨论
4.3.1 胶粒外观
4.3.2 固定化酶催化结果
4.3.3 海藻酸钠浓度对催化的影响
4.3.4 氯化钙浓度对催化的影响
4.3.5 固定化酶的热稳定性
4.3.6 固定化酶的pH稳定性
4.3.7 H2O2浓度对固定化酶催化的影响
4.4 小结
5 本文结论与展望
5.1 结论
5.2 创新点
5.3 展望
参考文献
攻读硕士学位期间发表论文及科研成果
致谢
综述
参考文献
本文编号：3898394
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/yiyaoxuelunwen/3898394.html
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