双氯芬酸钠治疗类风湿性关节炎中影响滑膜细胞能量代谢作用的实验研究

发布时间：2024-03-02 04:15

　　目的双氯芬酸钠治疗类风湿关节炎机制的再研究,并从糖酵解方面探讨其可能机制。方法MTT法检测细胞增殖抑制;基因芯片检测糖酵解和线粒体相关基因的变化;利用计算机辅助药物设计基于蛋白结构的靶点进行预测,使双氯芬酸分别与糖代谢相关的蛋白晶体结构进行分子对接,选择结合活性预测高的靶点进行详细分子作用分析;乳酸试剂盒检测胞内乳酸变化,通过脂质体Lipofectamine 2000将si-COX-2 Inhibitor、si-PKM2 Inhibitor、si-GLUT1 Inhibitor分别转染至人RA FLS细胞,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,RT-q PCR法和Western blot法分别检测糖酵解相关基因和蛋白的相对表达水平;2-NBDG检测大鼠关节滑膜组织葡萄糖摄取变化;免疫组化法检测大鼠滑膜组织COX-2糖酵解相关蛋白PKM2、GLUT1相对表达量。结果双氯芬酸对RA FLS细胞糖酵解有显著抑制作用,其中对糖酵解酶PKM2和GLUT1抑制作用较明显,机制为双氯酚酸钠通过COX-2介导RA FLS细胞中GLUT1/PKM2途径的诱导细胞凋亡。免疫组化结果同样证明...

【文章页数】：54 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
前言
第一章 双氯芬酸钠对RAFLS细胞增殖和凋亡的影响
    1.材料与方法
        1.1 .实验材料、试剂
        1.2 .细胞培养
        1.3 .MTT比色法检测细胞增殖
        1.4 .Annexin V-FITC/ PI双染法检测细胞凋亡
        1.5 .透射电子显微镜观察细胞死亡的方式
        1.6 .统计学处理
    2.结果
        2.1 .双氯芬酸钠对RAFLS细胞增殖和凋亡的影响
    3.讨论
    4.结论
第二章 COX-2 调节RA FLS细胞中PKM2/GLUT1 的表达诱导细胞凋亡
    1.材料与方法
        1.1 .实验材料、试剂
        1.2 .细胞培养
        1.3 .RT-q PCR
        1.4 .蛋白质印迹
        1.5 .基因芯片
        1.6 .乳酸的测定
        1.7 .检测细胞葡萄糖摄取
        1.8 .细胞内ATP水平检测
        1.9 .Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡
        1.10 .大鼠滑膜组织葡萄糖摄取
        1.11 .Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡
        1.12 .计算机辅助药物设计
    2 体内实验
        2.1 .动物模型的准备
        2.2 .动物分组和管理
        2.3 .免疫组化
        2.4 .组织病理学
        2.5 .统计学处理
    3.结果
        3.1 .双氯芬酸钠对RAFLS细胞糖酵解的影响
        3.2 .基于计算机辅助药物设计预测双氯芬酸钠糖酵解蛋白结构靶点
        3.3 .COX-2 调节RA FLS细胞中PKM2 的表达诱导细胞凋亡
        3.4 .GLUT1与COX-2/PKM2 通路的调节有关
        3.5 .双氯芬酸钠对AA大鼠滑膜组织病理学及大鼠滑膜组织COX-2,PKM2 和GLUT1表达的影响
    4.讨论
    5.结论
参考文献
致谢
附录A
附录B
附录C
    个人简历
综述
    参考文献



本文编号：3916319