二甲双胍诱导分子伴侣介导自噬的功能研究

发布时间：2024-03-29 21:10

　　分子伴侣介导的自噬(Chaperone mediated autophagy,CMA)是一种选择性自噬,由分子伴侣蛋白特异性地识别并结合胞质中含有KFERQ样基序(KFERQ-like motif)的蛋白并运送至溶酶体中降解。分子伴侣介导自噬通过选择性降解蛋白分子调控细胞内信号通路和各种生理过程,帮助细胞应对各种外界刺激和环境压力,维持细胞内环境稳态。随着研究的不断深入,人们发现CMA和肿瘤、肥胖、衰老、神经退行性等多种疾病密切相关。比如有研究发现,CMA可以通过调控肿瘤的糖代谢抑制肿瘤细胞。已糖激酶Ⅱ(HexokinaseⅡ,HK2)是糖酵解过程中的第一个限速酶,在许多癌细胞中高度表达,帮助癌细胞维持生长代谢,是一个潜在的抗癌药物靶点。我们的前期研究发现HK2是CMA底物,可以通过诱导分子伴侣介导自噬降解HK2蛋白的水平,破坏肿瘤细胞的代谢,抑制肿瘤细胞生长。但是到目前为止,还没有安全有效的分子伴侣介导自噬诱导化合物,这也制约了分子伴侣介导自噬相关疾病的药物开发。为了寻找具有成药价值的新型分子伴侣介导自噬诱导化合物,本实验构建了HK2-EGFP Tet-on药物筛选模型,得到了可以稳...

【文章页数】：82 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２．１载体信息??１９??

２．４．３酶切和连接??（１）酶切载体??载体信息如图２．１。酶切位点为Ｎｃｏ?Ｉ和Ａｇｅ?Ｉ。??（１０，３９６）?Ａｈｄｌ??Ｉ?Ｓｆｉｌ?（１３５２）??ＳＰｅ，（１３Ｓ８）??＾?＾?■－?．ｒ－－?ｎ?＇?＇?ｆｌ?－－；?／?／?．?Ｎｈｅｌ?（１７４３）??（＾ＪＢ....

图２．２ＨＫ２－ＥＧＦＰＴｅｔ－ｏｎ筛药模型的构建??（Ａ）转染了?ＨＫ２－ＥＧＦＰＴｅｔ－ｏｎ?质粒的?２９３Ｔ?经?Ｄｏｘ?（１?ｍｇ／ｍｌ?）诱导后，表迖?ＨＫ２－ＥＧＦＰ

图２．２ＨＫ２－ＥＧＦＰＴｅｔ－ｏｎ筛药模型的构建??（Ａ）转染了?ＨＫ２－ＥＧＦＰＴｅｔ－ｏｎ?质粒的?２９３Ｔ?经?Ｄｏｘ?（１?ｍｇ／ｍｌ?）诱导后，表迖?ＨＫ２－ＥＧＦＰ。２９３Ｔ??细胞按照每孔３ｘｌ〇５的细胞数量接种于６孔板，次日转染ＨＫ２－ＥＧＦＰＴｅｔ－ｏｎ质粒，....

图２．４?Ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ对各种癌细胞的杀伤性检测??（Ａ）?Ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ对癌细胞具有杀伤能力

剂盒）对细胞培养基中的ＡＴＰ进行定量测定来检测培养基中活细胞数目的方法，对??实验室现有的癌细胞系进行了?ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ的杀伤性检测。ＡＴＰ是活细胞新陈代谢??的一个指标，此试剂加入后产生一种“辉光型”的发光信号，细胞裂解和产生的??发光信号与存在的ＡＴＰ量成正比，而ＡＴＰ量....

图２．５?Ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ降低ＨＫ２ＳＳＡ１中ＨＫ２－ＥＧＦＰ的蛋白水平??（Ａ）和（Ｂ）?ＨＫ２ＳＳＡ１中ＨＫ２－ＥＧＦＰ的ＦＩＴＣ－Ａ值随着ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ浓度增加而降低，并呈浓度??梯度依赖关系

对ＨＫ２－ＥＧＦＰ?ＦＩＴＣ－Ａ值的降低呈现浓度梯度依赖关系，随着ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ作用浓度??的增加，ＨＫ２－ＥＧＦＰ的ＦＩＴＣ－Ａ值随之降低。并且，利用蛋白质免疫印迹（Ｗｅｓｔｅｒｎ??Ｂｌｏｔ，?ＷＢ）技术检测ＨＫ２ＳＳＡ１中ＨＫ２的蛋白水平，如图２．５所示，随着ｍｅｔｆｏ....

本文编号：3941308