KDM5B抑制剂筛选方法的建立及其抑制剂的筛选和作用机制研究

发布时间：2024-04-19 22:56

　　组蛋白赖氨酸去甲基化酶5B(Histone Lysine Demethylase 5B,KDM5B)是含Jmjc结构域的家族中的一员。KDM5B以Fe(II)和α-酮戊二酸为辅助因子能去除组蛋白3第4位赖氨酸的单、双、三甲基化的去甲基化酶。研究发现KDM5B参与多个靶基因启动子周围的抑制性转录复合物的形成,并对染色质结构发挥广泛的调节作用,与肿瘤的发生发展有密切关系。本课题组通过调研文献发现KDM5B在成人正常组织中表达量低,主要在睾丸和脑中会有较高的表达;而在乳腺癌、前列腺癌、胃癌、肺癌、口腔癌等多种实体瘤及白血病细胞中具有高表达。而且有大量证据表明KDM5B与肿瘤生长、血管生成、侵袭、转移和肿瘤相关的化疗耐药有关,具有一定的致癌作用。因此,KDM5B被认为是癌症治疗的潜在的药物靶标。目前科研工作者以KDM5B为药物靶点设计了许多抑制剂,但都存在选择性低或细胞通透率差等一些问题,目前仍然没有上市的KDM5B抑制剂。因此,开发具有自主知识产权、高效、高选择性、低毒副作用的KDM5B抑制剂具有非常重要的意义。在总结了前人经验的基础上,我们课题组借助于高通量虚拟筛选及基于结构的药物设计和结...

【文章页数】：71 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
英文缩略词表
1.前言
    1.1 表观遗传学
    1.2 甲基化修饰
    1.3 KDM5B
        1.3.1 KDM5B结构
        1.3.2 KDM5B去甲基化机制
        1.3.3 KDM5B与癌症关系
    1.4 KDM5B抑制剂的研究现状
    1.5 EMT
    1.6 本文的研究目的和主要内容
2.KDM5B小分子抑制剂筛选方法的建立
    2.1 实验原理和材料
        2.1.1 KDM5B小分子抑制剂活性测定的原理
        2.1.2 主要仪器
        2.1.3 主要试剂
        2.1.4 试剂配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 KDM5B蛋白活性检测
        2.2.2 酶反应体系稳定性及实用性评价
        2.2.3 KDM5B抑制剂的体外活性评价
    2.3 实验结果与讨论
        2.3.1 基于HTRF原理的KDM5B活性测定及条件优化
        2.3.2 反应体系稳定性及应用性评价结果
        2.3.3 化合物对KDM5B抑制活性评价结果
    2.4 小结
3.新型KDM5B抑制剂ZB-16 在胃癌中作用机制研究
    3.1 实验材料与试剂
        3.1.1 主要仪器设备
        3.1.2 主要试剂
        3.1.3 常用试剂配置
    3.2 实验方法
        3.2.1 细胞复苏
        3.2.2 贴壁细胞的传代
        3.2.3 细胞冻存
        3.2.4 细胞总蛋白提取
        3.2.5 细胞组蛋白提取
        3.2.6 蛋白BCA定量
        3.2.7 Western blot 实验
        3.2.8 MTT实验
        3.2.9免疫荧光实验
    3.3 实验结果
        3.3.1 胃癌细胞系中KDM5B的表达量
        3.3.2 化合物对MKN45 胃癌细胞的增殖的影响
        3.3.3 化合物对组蛋白修饰的影响
        3.3.4 化合物对组蛋白表达量的影响
        3.3.5 化合物对MKN45 胃癌细胞克隆形成的影响
        3.3.6 化合物对MKN45 胃癌细胞迁移能力的影响
        3.3.7 化合物对MKN45 胃癌细胞转移能力的影响
        3.3.8 化合物对 MKN45 胃癌细胞的热转移分析实验
        3.3.9 化合物对MKN45 胃癌细胞的EMT进程的影响
    3.4 小结
4.结论
参考文献
个人简历与研究成果
致谢



本文编号：3958503