用于抗西尼罗病毒药物筛选的假病毒报告系统的建立

发布时间：2024-05-12 19:13

　　目的为避免西尼罗病毒(WNV)研究中活病毒所带来的安全隐患,建立WNV的假病毒报告系统,用于抗WNV药物的筛选。方法构建含有海蜃荧光素酶报告基因的WNV复制子重组质粒prWNV-Rluc及表达WNV结构蛋白C、M和E的重组质粒pcDNA3.1-CME,并共转染293T细胞,72 h后获取含有假病毒的培养上清。结果用上清感染BHK21细胞后,BHK21细胞产生荧光,且荧光强度与感染细胞的假病毒量呈量效关系。Western印迹法实验检测到感染的BHK21细胞表达WNV NS1蛋白,证实上清中为WN假病毒。中和实验显示WNV中和性抗体能有效阻断WN假病毒对BHK21细胞的感染。结论建立了WNV的假病毒报告系统,规避了生物安全3级实验室(BSL-3)操作,可用于抗WNV药物的筛选。

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

图2WN假病毒上清对BHK21细胞的感染力检测

重组质粒prWNV-Rluc和pcDNA3.1-CME共转染293T细胞后不同时间段收取培养上清，10倍稀释后，感染BHK21细胞，48h后进行荧光素酶的检测。绘制动力学曲线，结果显示（图3），转染后24～72h，假病毒的感染力呈上升趋势，72～96h处于平台期，96h后....

图3西尼罗（WN）假病毒复制动力学

NS1是WNV的非结构蛋白，WNV感染宿主细胞后，病毒基因组在细胞内多轮复制，产生大量的非结构蛋白。为进一步验证获取的上清的确为WN假病毒，裂解上清感染后的BHK21细胞，用特异性的抗WNVNS1单抗进行检测。结果显示（图4），与对照细胞相比，上清感染的BHK21细胞内可检测到....

图4Western印迹法检测WNVNS1蛋白的表达

图3西尼罗（WN）假病毒复制动力学2.5抗体中和实验

图5抗体中和实验检测结果

WNV属于黄病毒属，可引起人畜共患病，严重可危及生命。随着WNV感染流行趋于全球化，中国存在输入风险。目前，尚无批准上市的疫苗以及药物用于人感染WNV的预防和治疗。因此，针对WNV的药物研发极有必要。中和实验是评价抗体类药物抗病毒作用的重要方法，但利用活病毒进行中和实验需要生物安....

本文编号：3971771