聚乙二醇化重组人促红素不同位点修饰率的测定

发布时间：2025-01-07 00:12

　　 目的:测定聚乙二醇化重组人促红素(PEG-EPO)中不同修饰位点的修饰率。方法:将重组促红素(EPO)及PEG-EPO样品分别用Lys-C蛋白酶进行酶切,在含0.1%三氟乙酸的流动相体系下液质联用测定液质肽图;通过质谱鉴定各肽段,在215 nm波长采集的肽图中积分计算各肽段的峰面积百分比;根据EPO及PEG-EPO肽图中对应肽段峰面积百分比的变化,利用软件计算各位点的修饰率。结果:所建立的方法成功计算出PEG-EPO中9个位点的修饰率。该方法还用于3家企业的产品比较,结果显示:3家企业的产品在PEG修饰方面的总体趋势一致,但在个别位点存在修饰率的差异,比如N-末端和Lys45。结论:该方法可用于PEG-EPO制品的常规质量控制,以及不同企业产品的比对研究。

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【部分图文】：

图2 修饰率计算软件界面

基于上述公式对各位点的修饰率进行拟合，拟合结果应符合残差和趋近于零。在以上逻辑下，自行设计自动评估软件进行拟合计算。该软件（内部使用）利用ViualFoxpro98编程语言编写，所用解析方法为最小二乘法，通过顺序搜索和结果分析控制将解析终点误差控制在2%以内，解析结果与预设理....

图3 3个厂家的PEG-EPO产品修饰情况比较

采用上述方法，分别对3个厂家（每家3批）的产品进行了PEG修饰率的测定，结果见图3。测定结果显示，9批产品在PEG修饰方面的大体趋势是一致的：N-末端修饰比例最高，其次是Lys52,Lys152修饰比例最低；不同厂家的产品也存在一定的区别，如厂家3的产品在N-末端的修饰比例相对更....

本文编号：4024202