硫化氢对顺铂诱导近端肾小管上皮细胞凋亡的干预研究

发布时间：2017-06-06 13:08

  本文关键词：硫化氢对顺铂诱导近端肾小管上皮细胞凋亡的干预研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:研究硫化氢对顺铂诱导近端肾小管上皮细胞凋亡的干预作用。研究顺铂影响近端肾小管上皮细胞后硫化氢干预的机制,探讨临床上顺铂导致的肾损害保护的新依据。方法:将实验根据随机对照原则分为三组:正常阴性对照组:无特殊处理;顺铂组,MTT实验顺铂浓度为(0mg/L、1 mg/L,2mg/L、5mg/L,10 mg/L,20 mg/L,40 mg/L),DAPI、Annexin V-FITC/PI染色、Annexin V-FITC/PI流式细胞术和实时定量PCR顺铂浓度为(20mg/L);顺铂加硫氢化钠共同作用组:MTT实验硫氢化钠浓度为(0mmol/L,0.2 mmol/L,0.4 mmol/L,0.5 mmol/L,0.8 mmol/L,1.0mmol/L、2.0mmol/L)与顺铂(20 mg/L)共同作用,DAPI、Annexin V-FITC/PI染色、Annexin V-FITC/PI流式细胞术和实时定量PCR为(0.5mmol/L、1.0mmol/L)硫氢化钠加(20mg/L)顺铂。硫氢化钠作为硫化氢的供体。体外培养人近端肾小管上皮细胞(Human Renal Tubular Epithelial Cell,HK-2 cell)和不同分组浓度药物作用24小时后,使用:1、甲氮甲唑蓝(3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-dipheny l-2-H-tetrazolium bromide,MTT)实验检测不同顺铂浓度作用后HK-2细胞的存活率,并检测不同浓度硫氢化钠与顺铂共同作用后细胞存活率。2、使用DAPI、Annexin V-FITC/PI染色检测各组HK-2细胞的凋亡形态学改变。3、Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测各组近端肾小管上皮细HK-2细胞凋亡率。4、实时定量PCR检测各组HK-2细胞DAXX mRNA、Fas mRNA表达产物量。结果:1、通过甲氮甲唑蓝实验(mtt)比较,1、2、5、10、20mg/l顺铂可以使hk-2细胞的凋亡增多,吸光值分别为0.229±0.022;0.198±0.024;0.189±0.069;0.188±0.030和0.165±0.012,在20mg/l时抑制率和0mg/l阴性对照组(0.270±0.064)相比有统计学意义(p0.05);在20mg/l顺铂和硫氢化钠浓度为0.2、0.4、0.5、0.8、1.0mmol/l的凋亡吸光值为0.173±0.051;0.186±0.023;0.259±0.050;0.263±0.033;0.268±0.098,和只使用20mg/l顺铂的阴性对照组(0.153±0.017)相比有统计学意义(p0.05)。但在1mmol/l,则对hk-2细胞保护下降(0.196±0.025)。2、dapi、annexinv-fitc/pi染色荧光显微镜显示,在20mg/l顺铂影响下,hk-2细胞平均视野凋亡细胞数为35.02±6.079,和正常阴性对照组4.23±1.015相比,有统计学意义(p0.01)。合用硫氢化钠凋亡减少,在0.5、1.0mmol/l的视野平均凋亡细胞为22.55±2.912、9.78±2.063。和顺铂组相比,有统计学意义(p0.05)。3、而annexinv-fitc/pi流式细胞术提示,在20mg/l顺铂影响下,hk-2细胞凋亡率为(31.598±1.014)%,和正常阴性对照组(5.167±0.612)%相比,有统计学意义(p0.01)。合用硫氢化钠凋亡减少,在0.5、1.0mmol/l的凋亡率为(18.375±2.239)%、(11.636±1.233)%和顺铂组相比,有统计学意义(p0.05)。4、实时荧光定量pcr提示,hk-2细胞在顺铂影响后,daxxmrna、fasmrna表达产物明显增多,和正常对照组相比有统计学意义(p0.05),而在硫氢化钠和顺铂共同影响下,daxxmrna、fasmRNA表达产物较前减少,和顺铂组相比,有统计学意义(p0.05)。结论:硫化氢对顺铂导致的近端肾小管上皮细胞的凋亡有保护作用,呈浓度依赖性。
【关键词】：HK-2细胞 硫化氢 顺铂 细胞凋亡
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R96
【目录】：

• 摘要4-7
• Abstract7-10
• 主要中英文缩写10-12
• 第一章 引言12-14
• 第二章 实验材料14-16
• 第三章 实验方法16-24
• 第四章 实验结果24-32
• 第五章 讨论32-40
• 第六章 结论40-42
• 参考文献42-48
• 文献综述48-60
• 参考文献55-60
• 致谢60

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