塞隆骨化学成分的分离纯化与生物活性初步研究

发布时间：2017-06-13 06:12

  本文关键词：塞隆骨化学成分的分离纯化与生物活性初步研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：本文以塞隆骨为研究对象,运用制备型高效液相色谱法和二维液相色谱法,分别从提取工艺方法的选择、不同模式的二维正交液相色谱方法的建立、主要单体化合物的纯化制备和组分化合物的活性初筛四个方面展开研究,为新药开发奠定了一定的物质基础。通过考察影响塞隆骨提取效果的因素,如提取方式、提取溶剂、提取时间、提取次数和料液比,对塞隆骨提取工艺进行优化,得到了最佳提取工艺;醇提物一维分离制备采用正相DAISO Silica柱,水提物采用反相DAISO C18柱,分别考察不同洗脱程序对分离过程的影响,最终确定了最佳制备方法工艺,正相制备色谱得到10个组分,反相得到5个组分,对样品进行了初步砍断分割,为后续二维分离制备提高了效率。二维建立了DAISO Silica柱和YMC Diol柱联用的新型2D-NPLC/HILIC制备色谱分离体系以及双硅胶柱联用(2D-NPLC/NPLC)的分离体系,具有良好选择性和正交性,实现了塞隆骨醇提物组分中小极性难分离物质和中等极性物质的一个高效分离制备,得到16个高纯度化合物,部分纯度达到98%以上,结合质谱和核磁数据对其结构进行表征,表明醇提组分主要物质为甾醇和有机酸类物质。对水提物运用建立的2D-RPLC/RPLC色谱体系,选择亲水高密度键合极性MP C18柱,对复杂水提组分进行了有效的分离,得到高纯度单一化合物9种,结构鉴定得到其序列,多为多肽,分子量为1kD左右,为塞隆骨进一步的药理、毒理活性研究提供新的物质基础。塞隆骨提取物对前破骨细胞(RAW264.7细胞)活性的初步筛选实验,表明醇提物中的6种组分具有明显抑制前破骨细胞的作用,进一步研究可开发为破骨细胞抑制剂。
【关键词】：塞隆骨 制备液相色谱 二维液相色谱 亲水作用色谱 分离纯化 前破骨细胞
【学位授予单位】：天津大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R914
【目录】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-10
• 前言10-11
• 第一章 文献综述11-25
• 1.1 塞隆骨研究背景概述11-17
• 1.1.1 高原鼢鼠简介11-12
• 1.1.2 塞隆骨化学成分研究进展12-13
• 1.1.3 塞隆骨药理作用研究进展13-16
• 1.1.4 塞隆骨的临床应用16
• 1.1.5 其它动物骨药材研究概况16-17
• 1.2 高效液相色谱17-19
• 1.2.1 高效液相色谱法的发展概况17-18
• 1.2.2 正相色谱（NPLC）18
• 1.2.3 反相色谱（RPLC）18-19
• 1.2.4 亲水色谱（HILIC）19
• 1.3 二维高效液相色谱法的研究现状19-21
• 1.3.1 二维高效液相色谱法的独特优点19-20
• 1.3.2 二维高效液相色谱法的技术功能20
• 1.3.3 二维高效液相色谱法的正交性20-21
• 1.3.4 二维高效液相色谱法的应用21
• 1.4 制备型高效液相色谱概述21-24
• 1.4.1 制备色谱的分类22
• 1.4.2 制备色谱方法的建立22-23
• 1.4.3 高效液相色谱制备的策略23
• 1.4.4 制备色谱在中药研究中的应用23-24
• 1.5 本文研究的主要内容24-25
• 第二章 塞隆骨一维高效液相色谱的分离制备25-40
• 2.1 实验原料、试剂及仪器设备25-27
• 2.1.1 实验原料25
• 2.1.2 实验试剂25-26
• 2.1.3 仪器设备26
• 2.1.4 实验装备26-27
• 2.2 实验方法27-29
• 2.2.1 塞隆骨样品的提取和预处理27-28
• 2.2.2 分析色谱条件28-29
• 2.2.3 制备色谱条件29
• 2.3 实验步骤29-30
• 2.4 结果与讨论30-38
• 2.4.1 提取工艺的优化30-33
• 2.4.2 色谱条件的优化33-35
• 2.4.3 分析液相到制备液相的线性放大35-36
• 2.4.4 塞隆骨一维各组分的收集和分析36-38
• 2.4.5 塞隆骨一维各组分的得率38
• 2.5 小结38-40
• 第三章 塞隆骨醇提物的二维液相色谱分离制备40-61
• 3.1 实验原料、试剂及仪器设备40-42
• 3.1.1 实验原料40
• 3.1.2 实验试剂及仪器设备40-42
• 3.2 实验方法42-44
• 3.2.1 样品的制备42
• 3.2.2 二维色谱分离系统的建立42-44
• 3.2.3 操作步骤44
• 3.3 结果与讨论44-60
• 3.3.1 制备组分的色谱分析44-46
• 3.3.2 目标单组分的最佳色谱模式46-55
• 3.3.3 单体化合物的纯度检测55-57
• 3.3.4 单体化合物的结构鉴定57-60
• 3.4 小结60-61
• 第四章 塞隆骨水提物的二维液相色谱分离制备61-70
• 4.1 实验原料、试剂及仪器设备61-63
• 4.1.1 实验原料61-62
• 4.1.2 实验试剂及仪器设备62-63
• 4.2 实验方法63-64
• 4.2.1 样品的制备63
• 4.2.2 色谱条件63
• 4.2.3 二维色谱分离系统的建立63-64
• 4.2.4 操作步骤64
• 4.3 结果与讨论64-69
• 4.3.1 水提组分的最佳二维色谱模式64-67
• 4.3.2 水提物中单体化合物纯度检测67-69
• 4.3.3 单体化合物的结构鉴定69
• 4.4 小结69-70
• 第五章 塞隆骨提取物的细胞活性初步筛选70-79
• 5.1 塞隆骨醇提组分对前破骨细胞生长的影响70-76
• 5.1.1 实验材料70-72
• 5.1.2 实验方法72-73
• 5.1.3 实验结果和分析73-76
• 5.2 塞隆骨水提组分对成骨细胞生长的影响76-78
• 5.2.1 实验材料76-77
• 5.2.2 实验方法77
• 5.2.3 实验结果和分析77-78
• 5.3 小结78-79
• 第六章 结论与展望79-81
• 6.1 结论79-80
• 6.2 展望80-81
• 参考文献81-88
• 发表论文和参加科研情况说明88-89
• 致谢89-90

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