重组人脑利钠肽表达及生物学活性测定

发布时间：2017-06-25 08:16

  本文关键词：重组人脑利钠肽表达及生物学活性测定，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：脑利钠肽(Brain natriuretic peptide,BNP,又称B型钠尿肽)是于1988年由日本学者Sudoh等首次从猪脑中分离而得来的,但实际上脑利钠肽的主要来源是心室,尤其是左心室为主。脑利钠肽与A型利钠肽(Atrial natriuretic peptide,ANP)、C型利钠肽(C-type natriuretic peptide,CNP)同属于利钠肽(Natriuretic peptide,NP)家族。利钠肽家族是维持血压稳定及水、盐代谢平衡的关键调节因子,心力衰竭(Heart failure,HF)时由于容量超载和心室壁张力增加,利钠肽家族就被高度激活。利钠肽家族具有调节血压,利尿,扩张心外膜以及冠状动脉,抑制血管平滑肌增殖,抑制血管组织增生等作用。所以利钠肽家族在检测和治疗心血管系统疾病方面有着巨大的前景。脑利钠肽是一种多肽类神经激素,由32个氨基酸残基构成,其中氨基端第7个和第23个残基由二硫键形成环状结构,形成脑利钠肽的功能域。与其天然受体结合后,可激活其胞Qg区的鸟苷酸环化酶活性,催化三磷酸鸟苷(Guanosine triphosphate,GTP)转化为环磷酸鸟苷(Cyclic guanosine monophosphate,cGMP)。所以通过检测cGMP含量可以测定重组人脑利钠肽的生物学活性。通过分子克隆的方法,对人脑利钠肽的基因序列进行优化合成,构建表达载体,对其进行测序鉴定,并转化到大肠埃希菌BL21原核表达系统中,筛选阳性单克隆菌落,得到重组人脑利钠肽的工程菌,并进行脑利钠肽大规模诱导表达,然后纯化出重组人脑利钠肽蛋白,最后建立酶联免疫吸附剂测定(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)活性的方法,用于脑利钠肽的生物学活性测定。
【关键词】：重组人脑利钠肽 利钠肽家族 心力衰竭 竞争性酶联免疫(ELISA)活性检测 免疫印迹法
【学位授予单位】：河北科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R945
【目录】：

• 摘要5-6
• Abstract6-9
• 第1章 绪论9-19
• 1.1 脑利钠肽的分子结构及作用机制9-12
• 1.1.1 脑利钠肽的分子结构9-11
• 1.1.2 脑利钠肽的组织特异性表达11-12
• 1.1.3 脑利钠肽的受体12
• 1.2 脑利钠肽的生理功能12-13
• 1.3 脑利钠肽的应用13-15
• 1.3.1 脑利钠肽在心力衰竭的诊断中的应用13-14
• 1.3.2 脑利钠肽在预后中的应用14
• 1.3.3 脑利钠肽在心力衰竭的治疗中的应用14-15
• 1.3.4 脑利钠肽在左心室功能障碍疗效检测中的应用15
• 1.4 重组蛋白的原核表达系统15-16
• 1.4.1 原核表达系统15-16
• 1.4.2 基因设计对重组蛋白表达的影响16
• 1.4.3 亲和标签对融合蛋白的影响16
• 1.5 酶联免疫吸附剂测定（ELISA）16-17
• 1.5.1 竞争法酶联免疫吸附测定17
• 1.6 课题的研究背景、内容及意义17-19
• 1.6.1 课题的研究背景17-18
• 1.6.2 课题的研究意义18
• 1.6.3 课题的主要研究内容18-19
• 第2章 重组人脑利钠肽高效可溶性表达系统的构建19-33
• 2.1 材料与方法19-30
• 2.1.1 实验设备及耗材19
• 2.1.2 实验药品与试剂19-21
• 2.1.3 实验药品配制21-23
• 2.1.4 试验方法23-30
• 2.2 结果与讨论30-32
• 2.2.1 载体构建30-31
• 2.2.2 工程菌筛选31-32
• 2.3 本章小结32-33
• 第3章 重组人脑利钠肽蛋白的纯化33-39
• 3.1 材料与方法33-34
• 3.1.1 主要试剂耗材33
• 3.1.2 仪器与设备33
• 3.1.3 试剂配制33-34
• 3.1.4 实验方法34
• 3.2 结果与讨论34-37
• 3.2.1 目的蛋白纯化34-37
• 3.3 本章小结37-39
• 第4章 重组人脑利钠肽蛋白的理化性质及生物学活性测定39-49
• 4.1 材料与方法39-44
• 4.1.1 主要试剂39
• 4.1.2 主要材料39-40
• 4.1.3 仪器与设备40
• 4.1.4 试验方法40-44
• 4.2 结果与讨论44-47
• 4.2.1 理化性质44-47
• 4.3 本章小结47-49
• 结论49-51
• 参考文献51-57
• 攻读硕士学位期间所发表的论文57-59
• 致谢59-61
• 个人简历61

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本文编号：481434