DHA偶联牛血清白蛋白包载多西紫杉醇肿瘤靶向纳米粒的制备、表征及体内外活性评价

发布时间：2017-07-06 06:18

  本文关键词：DHA偶联牛血清白蛋白包载多西紫杉醇肿瘤靶向纳米粒的制备、表征及体内外活性评价

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【摘要】：多西紫杉醇(DTX)是经半合成得到的紫杉醇衍生物,其抗肿瘤机制与紫杉醇相似,属于紫杉烷类抗肿瘤药物。研究表明,多西紫杉醇对多种癌症有良好的治疗效果,如乳腺癌、卵巢癌和非小细胞肺癌,且其抗癌活性高于紫杉醇。但是目前的多西紫杉醇制剂还存在一些问题,如水溶性差,靶向性差,有一定致敏性及毒副作用。根据多西紫杉醇存在的缺陷,本试验以牛血清白蛋白(BSA)为载体,采用乳化法制备多西紫杉醇的纳米微球(DTX-DHA-BSA-NPs),并通过单因素试验优化制备DTX-DHA-BSA-NPs的条件。在本文中,以DTX-DHA-BSA-NPs粒径为评价指标,选取7个因素为单因素条件,即BSA浓度、DTX浓度、DTX的溶剂氯仿与水的体积比、匀浆速度、匀浆时间、均质压力、均质时间,优化DTX-DHA-BSA-NPs的制备条件。最终得到的最佳制备条件为：BSA浓度0.04mg/mL、DTX浓度0.04mg/mL、DTX的溶剂氯仿与水的体积比1：13、匀浆速度400rpm、匀浆时间6min、均质压力600bar、均质时间8min。在此条件下,制备的DTX-DHA-BSA-NPs的粒径为156.7±5.4nm,电位为-32.37±1.95mV,载药量为10.7%±0.4%,包封率为98.6%±9.3%,二十二碳六烯酸(DHA)含量为4.58%±0.2%。通过扫描电镜(SEM)、X射线衍射分析法(XRD)、示差扫描量热分析法(DSC)等检测手段,研究DTX-DHA-BSA-NPs的性状,结果表明DTX-DHA-BSA-NPs呈不规则近似球形,DTX在DTX-DHA-BSA-NPs中以无定形状态存在。DTX-DHA-BSA-NPs的稳定性试验表明DTX-DHA-BSA-NPs稳定性良好,且DTX-DHA-BSA-NPs的体外释放试验表明其释放具有缓释的特点。本试验以人乳腺癌细胞MCF-7为媒介,研究发现DTX-DHA-BSA-NPs具有一定靶向性。并通过MTT试验研究DTX-DHA-BSA-NPs对小鼠肺癌细胞LLC、人乳腺癌细胞MCF-7、人肺癌细胞A549、人胃癌细胞SGC7901、人胆囊癌细胞GBC-SD、人胆管癌细胞RBE生长的抑制情况来研究DTX-DHA-BSA-NPs的体外抗癌活性,无论是48h(0.029μM)或是72h(0.012μM),DTX-DHA-BSA-NPs的IC50都低于DTX-BSA-NPs和多西紫杉醇,表明DTX-DHA-BSA-NPs的体外抗癌活性优于DTX-BSA-NPs和多西紫杉醇。本试验分别用昆明小鼠建立小鼠腹水瘤模型及C57BL/6小鼠建立肺癌骨转移模型,研究DTX-DHA-BSA-NPs的体内活性,结果表明DTX-DHA-BSA-NPs的体内抗癌活性优于DTX-BSA-NPs和多西紫杉醇。本文通过乳化法制备的DTX-DHA-BSA-NPs具有较好的稳定性,较强的体外释放可控性,较小的毒副作用,较好的靶向性,体内外抗癌活性均优于多西紫杉醇。
【关键词】：多西紫杉醇 二十二碳六烯酸 牛血清白蛋白 纳米粒 肿瘤靶向
【学位授予单位】：东北林业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R943
【目录】：

• 摘要3-4
• Abstract4-9
• 1 绪论9-16
• 1.1 引言9-10
• 1.2 多西紫杉醇概述10-12
• 1.2.1 多西紫杉醇的结构10
• 1.2.2 多西紫杉醇的理化性质10-11
• 1.2.3 多西紫杉醇的抗癌作用机制11
• 1.2.4 多西紫杉醇的剂型11
• 1.2.5 多西紫杉醇存在的缺陷11-12
• 1.3 二十二碳六烯酸概述12-13
• 1.3.1 二十二碳六烯酸的结构12
• 1.3.2 二十二碳六烯酸的理化性质12
• 1.3.3 二十二碳六烯酸的生理功能12-13
• 1.4 白蛋白概述13
• 1.4.1 白蛋白载药方式、生物学基础、缺陷13
• 1.5 纳米药物概述13-14
• 1.5.1 纳米药物的类型、优势14
• 1.5.2 纳米药物的制备方法、载体14
• 1.5.3 纳米药物的应用14
• 1.6 靶向制剂概述14-15
• 1.6.1 靶向制剂种类、载体15
• 1.7 课题的研究内容及意义15-16
• 1.7.1 课题的研究内容15
• 1.7.2 课题的研究意义15-16
• 2 多西紫杉醇白蛋白纳米粒子的制备16-24
• 2.1 试验材料与试剂16
• 2.2 试验仪器设备16
• 2.3 DHA-BSA-NPs的制备16-17
• 2.4 DTX-DHA-BSA-NPs的制备17
• 2.5 DTX-DHA-BSA-NPs制备的单因素试验17-18
• 2.6 DTX-BSA-NPs的制备18
• 2.7 纳米粒子粒径、电位的测定18
• 2.8 实验结果与分析18-23
• 2.8.1 DTX-DHA-BSA-NPs制备的单因素试验结果18-23
• 2.8.2 各纳米粒子的粒径及电位23
• 2.9 本章小结23-24
• 3 多西紫杉醇白蛋白纳米粒子的表征24-33
• 3.1 试验材料与试剂24
• 3.2 试验仪器设备24
• 3.3 DTX含量的测定及浓度标准曲线的绘制24
• 3.4 DHA含量的测定及浓度标准曲线的绘制24-25
• 3.5 DTX-DHA-BSA-NPs载药量及包封率的测定25-26
• 3.6 DTX-DHA-BSA-NPs的SEM、XRD、DSC检测26
• 3.7 DTX-DHA-BSA-NPs的稳定性测定26
• 3.8 纳米粒子的体外释放性质测定26
• 3.9 实验结果与分析26-31
• 3.9.1 DTX的浓度标准曲线26-27
• 3.9.2 DHA的浓度标准曲线27-28
• 3.9.3 DTX-DHA-BSA-NPs载药量及包封率检测结果28-29
• 3.9.4 DTX-DHA-BSA-NPs的SEM检测结果29
• 3.9.5 DTX-DHA-BSA-NPs的XRD检测结果29-30
• 3.9.6 DTX-DHA-BSA-NPs的DSC检测结果30
• 3.9.7 DTX-DHA-BSA-NPs稳定性检测结果30-31
• 3.9.8 DTX-DHA-BSA-NPs体外释放检测结果31
• 3.10 本章小结31-33
• 4 多西紫杉醇白蛋白纳米粒子活性的测定33-45
• 4.1 试验材料与试剂33
• 4.2 试验仪器设备33
• 4.3 DTX-DHA-BSA-NPs体外抗癌活性测定33-34
• 4.4 DTX-DHA-BSA-NPs靶向性测定34
• 4.5 DTX-DHA-BSA-NPs对小鼠肺癌细胞迁移的影响34-35
• 4.6 DTX-DHA-BSA-NPs对小鼠肺癌细胞诱导破骨细胞形成的影响35
• 4.7 DTX-DHA-BSA-NPs体内抗癌活性测定35-36
• 4.7.1 DTX-DHA-BSA-NPs最大耐受剂量测定35
• 4.7.2 DTX-DHA-BSA-NPs抗腹水瘤活性测定35-36
• 4.7.3 DTX-DHA-BSA-NPs抗肺癌骨转移活性测定36
• 4.7.4 碱性磷酸酶含量测定36
• 4.7.5 组织病理检测36
• 4.8 实验结构与分析36-44
• 4.8.1 DTX-DHA-BSA-NPs体外抗癌活性测定结果36-37
• 4.8.2 DTX-DHA-BSA-NPs靶向性测定结果37-38
• 4.8.3 DTX-DHA-BSA-NPs对小鼠肺癌细胞迁移的影响38-39
• 4.8.4 DTX-DHA-BSA-NPs对小鼠肺癌细胞诱导破骨细胞形成的影响39
• 4.8.5 DTX-DHA-BSA-NPs体内抗癌活性测定结果39-44
• 4.9 本章小结44-45
• 结论45-46
• 参考文献46-51
• 附录51-52
• 攻读学位期间发表的学术论文52-53
• 致谢53-54

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3 张U喦，

本文编号：525043