新化学结构真菌次级代谢产物的抗肿瘤活性筛选及作用研究

发布时间：2017-07-07 19:22

  本文关键词：新化学结构真菌次级代谢产物的抗肿瘤活性筛选及作用研究

  更多相关文章： 真菌次级代谢产物 多硫代二酮哌嗪类化合物 C87 肿瘤 生长抑制

【摘要】：多硫代二酮哌嗪(ETP)类化合物是由真菌产生的一类次级代谢产物,其结构新颖、立体化学结构独特、骨架类型多样,因此ETP类化合物的生物活性研究一直备受关注。现有研究发现ETP具有抗肿瘤、抗病毒、抗菌以及免疫抑制等作用。ETP类化合物的抗肿瘤效应显示出一定的靶向性,如可以通过激活p53信号通路诱导细胞周期发生G2/M期阻断、抑制酪氨酸激酶活性以及抑制肿瘤组织新生血管的形成。本所研究人员在真菌中提取到八种新化学结构的ETP类真菌次级代谢产物(C80、C86、C87、 662、DR56-1、DR56-52、zw-2、DS56-10),其抗肿瘤活性有待检验。本研究拟在细胞水平进行抗肿瘤活性的初步筛选,在此基础上对活性较好的化合物进行体内外抗肿瘤作用评价,并同时开展活性化合物抗肿瘤作用机制的研究。实验方法：(1)以磺酰罗丹明B(SRB)法观察ETP类化合物对体外培养的肿瘤细胞存活率的影响,并计算50%生长抑制浓度(GI50)。(2)在裸鼠异种移植瘤模型上评价化合物C87的体内抗肿瘤作用。(3)建立以实时细胞分析(RTCA)系统实时监测肿瘤细胞生长情况的方法,评价化合物C87对肿瘤细胞生长增殖的影响。(4)以流式细胞术检测C87对细胞内活性氧产生、细胞周期、线粒体膜电位、以及对细胞凋亡的影响。(5)通过用比色法检测带有生物素标签的AP位点来评价C87对DNA损伤的影响。(6)采用Western Blot方法检测C87对肿瘤细胞内凋亡相关分子蛋白表达水平的影响。实验结果：(1)本研究首先在HeLa、HCT116、SMMC7721、A549、 H460、H1993、H157、MDA-MB-231等多种肿瘤细胞系上,评价了八种新化学结构的真菌次级代谢产物(C80、C86、C87、662、DR56-1、DR56-52、 zw-2、DS56-10)对细胞生长增殖的影响,发现ETP类化合物C80、C86、C87对上述几种细胞系均具有不同程度的细胞生长抑制活性,其他五种化合物则作用不明显。(2)以化合物C87为主要研究对象,结果显示C87能抑制多种肿瘤细胞增殖,具有浓度及时间依赖性；并且能够一定程度地抑制裸鼠体内移植瘤的生长增殖,抑瘤率为33.22%。(3)化合物C87可时间及浓度依赖性地诱导肿瘤细胞内ROS产生。伴随给予抗氧化剂NAC后能明显抑制C87引起的细胞内ROS产生,并且NAC可以明显逆转C87引起的细胞生长抑制作用。(4)化合物C87可以浓度依赖性诱导细胞周期G0/G1期阻滞,上调p53蛋白表达。(5)化合物C87可以浓度依赖性诱导细胞线粒体膜电位下降。(6)化合物C87可以诱导细胞凋亡,具有浓度及时间依赖性,伴随给予抗氧化剂NAC后能明显抑制C87引起的细胞凋亡。(7)化合物C87可以诱导细胞色素C释放,启动Caspase-8,使Caspase-3活化,促进PARP裂化。结论：从八种新化学结构的化合物中筛选出抗肿瘤作用明显的三个ETP类化合物C80、C86、C87,因其母核结构相同且作用效果相当,因此以C87为主要研究对象,发现其对多种肿瘤细胞的生长具有抑制作用,呈浓度及时间依赖性。其抗肿瘤作用机制可能有以下几种：(1)C87可能通过诱导细胞生成过量ROS,引起细胞内氧化应激及DNA损伤,最终使细胞生长受抑或诱发凋亡；(2)C87可能通过上调p53蛋白的表达,阻滞细胞周期于G0/G1期,从而抑制细胞生长增殖；(3)C87可能通过破坏线粒体膜电位,使线粒体通透性增加,诱导细胞色素C释放,启动Caspase-8,使Caspase-3活化,促进PARP的裂化,最终导致肿瘤细胞发生凋亡。
【关键词】：真菌次级代谢产物 多硫代二酮哌嗪类化合物 C87 肿瘤 生长抑制
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R915
【目录】：

• 英文缩略词表6-8
• 摘要8-10
• ABSTRACT10-13
• 前言13-17
• 第一章 八种真菌次级代谢产物抗肿瘤活性的初步筛选17-30
• 一、材料19
• 二、方法19-24
• 三、结果24-28
• 四、讨论28-30
• 第二章 化合物C87体内外抗肿瘤活性评价及可能机制30-81
• 一、材料31-32
• 二、方法32-52
• 三、结果52-76
• 四、讨论76-81
• 全文总结81-83
• 参考文献83-90
• 综述90-104
• 参考文献96-104
• 致谢104-105
• 在读期间发表文章105-106
• 附件106-112

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 杨烨;王e，

本文编号：531519