基于功能化金纳米探针检测透明质酸酶和金黄色葡萄球菌

发布时间：2017-07-17 07:17

  本文关键词：基于功能化金纳米探针检测透明质酸酶和金黄色葡萄球菌

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【摘要】：纳米材料独特的物理性能和优异的光、电、磁以及机械性能,使其在生物医药等领域具有十分广泛的应用。其中,金纳米粒子因能显著地猝灭其周围荧光基团的荧光信号,被广泛地运用于构建表面能量转移(NSET)探针以检测各类物质如生物活性物质、环境污染物、疾病标志物等。同时,金纳米簇因具有较高的荧光量子产量,被广泛地运用于荧光标记以检测各类物质。本文基于金纳米材料的荧光性质,结合NSET分析技术和双位点分子识别模式分别构建了检测疾病标志物和病原微生物的新方法：(1)一步合成透明质酸功能化的荧光金纳米NSET探针用于肿瘤患者尿液中透明质酸酶(HAase)快速灵敏检测。在本工作中,以异硫氰酸荧光素标记的透明质酸(FITC-HA)同时作为还原剂和稳定剂直接还原氯金酸,在温和的环境下快速一步合成粒径均一、稳定性好、且功能化的FITC-HA-AuNPs探针,并用此探针基于HAase对HA的专一性水解作用,特异性地检测疾病标志物HAase。与现有检测HAase的方法相比,本工作简化了检测探针制备的步骤、缩短了检测时间(仅需3 h)、提高了灵敏度和准确度(LOD:0.63 U mL-1, Recovery:92.77-106.90%)、且可以直接用于实际样本中(膀胱癌病人尿液)HAase的检测,具有良好的准确度(RSD4.85%)。本研究工作将有望为膀胱癌等与HAase相关的疾病临床诊断提供新的一个灵敏、快速、准确的检测技术。(2)基于核酸适配体-磁珠与抗生素-金纳米簇双识别作用特异灵敏检测金黄色葡萄球菌(SA)。致病菌引起的感染性疾病、食品污染等给社会带来很大危害,其中SA是最常见的致病菌之一。本工作构建了一种基于核酸适配体-磁珠(Aptamer-magnetic beads)与抗生素-金纳米簇(AuNCs@Van)双识别作用特异灵敏检测SA的新方法。选用Aptamer-magnetic beads分离并富集混合细菌中的SA,再利用一步合成的AuNCs@Van定量检测SA,检测限为几十个细菌,并初步探索了该方法对牛奶中SA的检测。相比于已有的SA检测工作,本工作具有以下特点：双识别分子核酸适配体与抗生素的特异性、价廉易得,且捕获探针可重复利用；检测探针AuNCs@Van制备条件温和、且制备过程简单、快速。本研究工作有望对由SA引起的食品污染提供可能的新技术。
【关键词】：金纳米粒子 表面共振能量转移 透明质酸酶 细菌 核酸适配体 金纳米簇 抗生素 双识别
【学位授予单位】：西南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：TB383.1;R914.5
【目录】：

• 摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 缩写符号对照表10-11
• 第一章 绪论11-27
• 1.1 引言11-12
• 1.2 金纳米材料概述12-14
• 1.2.1 金纳米材料的性质12
• 1.2.2 金纳米材料的制备12-14
• 1.3 金纳米材料的应用14-21
• 1.3.1 在环境污染监测中的应用14-16
• 1.3.2 在疾病标志物检测中的应用16-18
• 1.3.3 在食品安全监控中的应用18-21
• 1.4 论文的出发点及主要内容21-22
• 参考文献22-27
• 第二章 透明质酸功能化的荧光金纳米NSET探针用于肿瘤患者尿液中HAase快速灵敏检测27-43
• 2.1 引言27-28
• 2.2 实验部分28-30
• 2.2.1 仪器与试剂28-29
• 2.2.2 FITC-HA-AuNPs纳米材料的合成29
• 2.2.3 FITC-HA-AuNPs纳米探针稳定性实验29
• 2.2.4 基于FITC-HA-AuNPs纳米探针检测HAase29-30
• 2.2.5 基于FITC-HA-AuNPs纳米探针检测人尿液中HAase30
• 2.3 结果与讨论30-38
• 2.3.1 FITC-HA-AuNPs纳米探针制备条件优化30-31
• 2.3.2 FITC-HA-AuNPs纳米探针的表征31-33
• 2.3.3 FITC-HA-AuNPs纳米探针检测HAase33-36
• 2.3.4 FITC-HA-AuNPs纳米探针选择性考察36-37
• 2.3.5 基于FITC-HA-AuNPs纳米探针检测人尿液中HAase含量37-38
• 2.4 结论38-39
• 参考文献39-43
• 第三章 基于核酸适配体-磁珠与抗生素-金纳米簇双识别作用特异灵敏检测金黄色葡萄球菌43-61
• 3.1 引言43-45
• 3.2 实验部分45-47
• 3.2.1 仪器与试剂45
• 3.2.2 AuNCs@Van荧光金纳米簇制备方法45
• 3.2.3 AuNCs@Van荧光金纳米簇稳定性实验45-46
• 3.2.4 Aptamer-magnetic beads制备46
• 3.2.5 AuNCs@Van荧光金纳米簇定量检测SA46
• 3.2.6 基于Aptamer-magnetic beads与AuNCs@Van双识别特异灵敏检测SA46
• 3.2.7 方法选择性验证46
• 3.2.8 混合细菌中SA检测限考察46-47
• 3.2.9 牛奶样品中SA检测47
• 3.3 结果与讨论47-54
• 3.3.1 AuNCs@Van荧光金纳米簇制备条件优化47
• 3.3.2 AuNCs@Van荧光金纳米簇的表征47-49
• 3.3.3 AuNCs@Van荧光金纳米簇稳定性考察49-50
• 3.3.4 AuNCs@Van荧光金纳米簇定量检测SA50-51
• 3.3.5 基于Aptamer-magnetic beads和AuNCs@Van双识别作用分离并检测SA51-54
• 3.3.6 牛奶样品中SA检测54
• 3.4 结论54-56
• 参考文献56-61
• 致谢61-63
• 攻读硕士学位期间研究成果63

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 冯异;赵军武;齐晓霞;高芬;;纳米材料及其应用研究进展[J];工具技术;2006年10期

2 吴维明,蔡强,陈裕泉;纳米金在生物检测中的应用[J];国外医学.生物医学工程分册;2003年05期

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本文编号：552476