TRP通道调节胆囊平滑肌收缩作用与其小分子调节剂筛选研究

发布时间：2017-08-04 04:17

  本文关键词：TRP通道调节胆囊平滑肌收缩作用与其小分子调节剂筛选研究

  更多相关文章： TRPC 离子通道 1-H-苯并咪唑-2-胺类衍生物 合成 抑制活性 TRP通道 TRPP2 收缩 胆囊平滑肌 钙库 三磷酸肌醇受体

【摘要】：TRPC4离子通道小分子调节剂的筛选目的瞬时感受器电位C离子通道(Transient Receptor Potential Canonical,TRPC channels)是一类可调节细胞内钙浓度的非特异性阳离子通道,在体内分布广泛,参与多种不同生理功能,包括对神经、心血管、消化、呼吸、内分泌和泌尿系统的调节。目前,针对TRPC特异性的小分子化合物较少,且特异性差。本研究中,旨在发现特异性好的TRPC4通道小分子调节剂,这对于研究TRPC4通道的生理功能,调节机理,以及临床应用都将起到很大的促进作用。方法1.化学合成:基于先导化合物ML401的母核结构,设计并化学合成了一系列1-H-苯并咪唑-2-胺类衍生物。2.PCR及突变制备TRPC4的突变体。3.钙成像检测:在细胞水平对这些化合物进行高通量筛选。4.膜片钳记录:某些对TRPC4具有较好的抑制活性的化合物以全细胞记录的方式进行进一步鉴别。结果1.设计合成了30个1-H-苯并咪唑 2-胺类化合物。2.制备出TRPC4的突变体(TRPC4 G503L)。3.化合物21活性(IC50=0.65μM)显著优于阳性化合物ML401(IC50=1.05μM)。4.化合物G1224对配体激活TRPC4通道有明显的增强作用(EC50=0.78μM)。结论发现一系列对TRPC4有良好抑制效应的化合物,尤其是化合物G1224对配体激活TRPC4通道有显著的增强作用。TRPP2通道调节胆囊平滑肌收缩作用目的TRPP2属于瞬时受体电位(transient receptorpotential,TRP)通道超家族的成员之一,广泛分布于多种组织中,包括消化道的平滑肌。大量的证据表明TRPP2通道能够调控细胞内钙库的释放。然而,TRPP2在胆囊平滑肌收缩中的作用仍不清晰。在本研究中,我们探讨了TRPP2在豚鼠胆囊平滑肌收缩中的调节作用及其机制。方法1.胆囊平滑肌条的制备:CO2窒息法将豚鼠窒息处死,立即取出胆囊。去除脂肪和浆膜层后,将胆囊沿纵轴切成一个1.0×0.3厘米的肌条。每条平滑肌条放入已经饱和有混合氧气(95%O2和5%CO2)的Krebs液的组织浴槽中。2.胆囊平滑肌条张力检测:使用数据采集和分析系统(BL-420S)来记录和分析收缩张力功能。用不同的激动剂去检测胆囊收缩功能的变化。3.胆囊平滑肌钙离子成像实验:将TRPP2 si RNA转染到胆囊平滑肌中,利用Leica SP5激光共聚焦显微镜系统检测激动剂诱导的细胞内钙离子浓度的变化。4.胆囊平滑肌Western blot实验:使用anti-TRPP2检测豚鼠胆囊平滑肌中TRPP2的蛋白表达水平。结果1.通过TRPP2特异性的si RNA转染,可以使豚鼠胆囊平滑肌内TRPP2蛋白表达被抑制,同时显著减小了胆囊平滑肌中Ca2+的释放和Ca2+内流,同样也抑制了激动剂引起的胆囊平滑肌收缩。2.U73122、2APB和TG可以显著抑制由卡巴胆碱引起的胆囊平滑肌收缩,消除了在TRPP2敲除组和scramble si RNA对照组中卡巴胆碱诱导胆囊平滑肌肌条收缩的不同。结论TRPP2通道介导了胆囊平滑肌细胞内钙库中Ca2+释放,并在激动剂诱导的胆囊平滑肌收缩中起着十分重要的作用。
【关键词】：TRPC 离子通道 1-H-苯并咪唑-2-胺类衍生物 合成 抑制活性 TRP通道 TRPP2 收缩 胆囊平滑肌 钙库 三磷酸肌醇受体
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R943
【目录】：

• 英文缩略词表6-7
• TRPC4离子通道小分子调节剂的筛选7-28
• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 1 前言11-12
• 2 材料与方法12-17
• 3 结果17-26
• 4 讨论26-27
• 5 结论27-28
• TRPP2通道调节胆囊平滑肌收缩作用28-45
• 摘要28-30
• Abstract30-32
• 1 前言32-33
• 2 材料与方法33-37
• 3 结果37-42
• 4 讨论42-44
• 5 结论44-45
• 参考文献45-50
• 简历50-51
• 致谢51-52
• 瞬时感受器电位C4离子通道及其小分子调节剂52-64
• 参考文献60-64

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 FU Jie;GAO ZhaoBing;SHEN Bing;ZHU Michael X.;;Canonical transient receptor potential 4 and its small molecule modulators[J];Science China(Life Sciences);2015年01期

2 张宗明;;胆道外科疾病的诊治现状与进展[J];世界华人消化杂志;2008年11期

，

本文编号：617704