雷帕霉素对瘢痕疙瘩成纤维细胞的作用和机制研究

发布时间：2017-08-17 15:11

  本文关键词：雷帕霉素对瘢痕疙瘩成纤维细胞的作用和机制研究

  更多相关文章： 瘢痕疙瘩成纤维细胞 雷帕霉素 细胞周期 自噬 细胞外基质 非编码RNA

【摘要】：研究背景及意义在纤维化疾病中,mTOR (mammalian target of rapamycin,哺乳动物雷帕霉素靶蛋白)信号通路的异常激活不仅参与成纤维细胞的的增殖、死亡、细胞周期等进程的调控,而且可能与纤维化疾病治疗中的耐药性相关。之前的研究已经证实mTOR信号通路的关键分子可以作为多种纤维化疾病治疗的靶点,所以我们推测mTOR的靶向抑制剂雷帕霉素(Rapamycin)对于瘢痕疙瘩这类纤维化疾病的治疗具有一定的临床应用意义。因此本研究以瘢痕疙瘩成纤维细胞为实验对象,探讨mTOR抑制剂雷帕霉素对瘢痕疙瘩成纤维细胞的作用及表观遗传学机理,为雷帕霉素在瘢痕疙瘩的临床应用提供实验依据。研究目的1、明确雷帕霉素对瘢痕疙瘩成纤维细胞生物学特性(增殖、凋亡、细胞周期)及细胞外基质(ECM)相关基因表达的影响及可能的作用机理。2、明确雷帕霉素对于瘢痕疙瘩成纤维细胞自噬发生的影响,进一步探究雷帕霉素对瘢痕疙瘩成纤维细胞mTOR信号转导通路的调控。3、明确不同浓度雷帕霉素诱导瘢痕疙瘩成纤维细胞自噬发生过程中,自噬相关非编码RNA表达的变化。研究方法以瘢痕疙瘩成纤维细胞为实验模型,雷帕霉素药物处理后,采用MTT法检测的细胞增殖情况；应用DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期情况；透射电镜观察雷帕霉素处理后的自噬体形成情况,Western blot检测自噬相关蛋白LC3的表达；Real-time PCR检测细胞外基质相关基因、自噬相关非编码RNA的表达。研究结果1、雷帕霉素能够抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖,但对瘢痕疙瘩成纤维细胞的凋亡并无明显影响,其可致痕疙瘩成纤维细胞处于G1期的细胞增多,并下调c-Myc,上调P27 mRNA的表达。并且,雷帕霉素能够抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞细胞外基质(ECM)相关基因(collagen-1、a-SMA和Fibronectin)的表达,下调其mRNA的表达水平。2、雷帕霉素处理后,透射电镜下瘢痕疙瘩成纤维细胞中可见肿胀的线粒体、自噬小体的双层膜结构、染色质聚集等细胞超微结构的变化,并伴有自噬相关蛋白LC3的表达增加。并且,mTOR下游通路基因4EBP1和p70S6K的表达均有下调。3、雷帕霉素能引起自噬相关非编码RNA (miR-885-3p、miR-30a、miR-630、miR-101、 miR-375、IncRNA FLJ11812 和 HULC5)表达的变化。结论雷帕霉素对瘢痕疙瘩成纤维细胞的生长具有抑制作用,使其发生G1期周期阻滞。虽然对瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡无显著影响,但雷帕霉素却能够激活其自噬的发生,并下调细胞外基质(ECM)相关基因的表达；雷帕霉素可抑制痕瘢疙瘩成纤维细mTOR信号通路的活化；雷帕霉素可能通过对痕疙瘩成纤维细中部分自噬相关非编码RNA表达的影响发挥其药理学功能。
【关键词】：瘢痕疙瘩成纤维细胞 雷帕霉素 细胞周期 自噬 细胞外基质 非编码RNA
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R363
【目录】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-8
• 引言8-14
• 第一章 雷帕霉素对瘢痕疙瘩成纤维细胞生物学特性的影响14-27
• 前言14-15
• 材料与方法15-20
• 研究结果20-25
• 结果讨论25-26
• 研究结论26-27
• 第二章 雷帕霉素对痕疙瘩成纤维细胞自噬和mTOR信号通路的影响27-39
• 前言27-28
• 材料与方法28-34
• 研究结果34-37
• 结果讨论37
• 研究结论37-39
• 第三章 雷帕霉素对瘢痕疙瘩成纤维细胞自噬相关非编码RNA表达的影响39-48
• 前言39-41
• 材料与方法41-44
• 研究结果44-46
• 结果讨论46-47
• 研究结论47-48
• 全文总结48-49
• 参考文献49-60
• 文献综述60-86
• 参考文献72-86
• 缩略词表86-87
• 附图87-89
• 致谢89-90

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 Yun Jeung Kim;Eaum Seok Lee;Seok Hyun Kim;Heon Young Lee;Seung Moo Noh;Dae Young Kang;Byung Seok Lee;;Inhibitory effects of rapamycin on the different stages of hepatic fibrosis[J];World Journal of Gastroenterology;2014年23期

，

本文编号：689658