枸橼酸氯米芬抑制大鼠子宫内膜增殖及机制的研究

发布时间：2017-08-31 09:27

  本文关键词：枸橼酸氯米芬抑制大鼠子宫内膜增殖及机制的研究

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【摘要】：研究目的：枸橼酸氯米芬(克罗米芬,Clomiphene Citrate, CC)是临床上常用的微刺激方案中促排卵药物,由于其价格低廉,使用方便,排卵效果好等优点,目前仍是微刺激超排方案中的一线药物。CC可以抑制子宫内膜的增殖,降低子宫内膜厚度和子宫内膜容受性,致使试管婴儿临床妊娠率降低、新生儿出生率偏低,但CC影响子宫内膜容增殖的分子机制至今尚未清楚。为了弄清CC如何通过抑制子宫内膜细胞增殖,以提高低刺激方案的临床成功率。本研究采用CC对雌性SD大鼠给药,然后我们用雌二醇(Estradiol, E2)来拮抗CC的抗雌激素作用,以期初步探讨CC对子宫内膜的影响机制,以及E2对CC的抗雌激素作用,缓解子宫内膜增殖障碍机制,为临床提高患者妊娠率提供相应依据。实验方法：本研究以220-250g体重的雌性SD大鼠为研究对象,对大鼠进行枸橼酸氯米芬灌胃给药,取其子宫内细胞做涂片染色,观察大鼠自然发情周期,在发情前期给药：枸橼酸氯米芬(Clomiphene Citrate, CC)、雌二醇(Estradiol, E2),0.9%生理盐水(Contral, CO),给药剂量分别为：CC:1mg/kg/body; E2:1 Omg/kg/body, CC组、CO组各5只,分别给药6天,Western Blot检测凋亡相关的PI3K/AKT、JNK、NF-κB、线粒体信号通路,以及雌激素受体mRNA转录水平的变化；CC+E2、CC、CO各组5只,分别给药10天,给药结束后提取子宫内膜组织总蛋白,Western Blot再次检测凋亡相关的PI3K/AKT、JNK、NF-κB以及线粒体信号通路相关蛋白表达。实验结果：CC给药组子宫内膜生长因子较对照组明显降低(P0.05),经过E2协同给药,其生长信号因子比CC组有所升高(P0.05),但并不能恢复正常值。CC组JNK、NF-κB信号通路蛋白表达较CO组显著升高,经E2协同给药后,JNK、NF-κB信号通路蛋白较CC组没有显著性变化。ESR1、ESR2荧光定量PCR检测较CO组没有变化,发现ESR1的转录表达显著高于ESR2。结论：1.枸橼酸氯米芬能够降低子宫内膜厚度,影响子宫内膜容受性：2.枸橼酸氯米芬上调子宫内JNK、NF-κB蛋白磷酸化水平,同时下调了生长信号相关蛋白水平；3.CC能够促进子宫内膜细胞的凋亡,抑制子宫内膜增生,而E2+CC的协同给药能够缓解此种症状。其分子机制可能和PI3K、JNK、NF-κB等通路相关；4.CC具有抗雌激素药物效应,但并不影响雌激素受体RNA的转录表达。
【关键词】：枸橼酸氯米芬 雌二醇 子宫内膜增殖 凋亡通路 生长信号通路
【学位授予单位】：昆明理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R965
【目录】：

• 摘要6-8
• ABSTRACT8-11
• 英文缩写词表11-17
• 本研究中用到的实验试剂17-21
• 实验用到的仪器21-22
• 第一章 绪论22-35
• 1.1 体外受精-胚胎移植技术23-24
• 1.2 枸椽酸氯米芬在辅助生殖领域中的应用24-25
• 1.3 子宫内膜增殖障碍机制25-35
• 1.3.1 雌激素受体途径抑制影响子宫内膜增殖25-29
• 1.3.2 线粒体途径影响子宫内膜增殖29-30
• 1.3.3 核转录因子JNK、NF-κB信号转导途径30-31
• 1.3.4 生长信号转导途径31-35
• 第二章 枸橼酸氯米芬引起子宫内膜增殖障碍制35-43
• 引言35-36
• 2.1 实验方案36
• 2.2 实验材料36-40
• 2.2.1 大鼠分组及模型建立36
• 2.2.2 试验主要试剂36-37
• 2.2.3 大鼠给药37
• 2.2.4 大鼠发情周期鉴定37-39
• 2.2.5 大鼠子宫内膜的HE染色及厚度测定39-40
• 2.3 统计学处40
• 2.4 实验结果与分析40-42
• 2.4.1 大鼠发情周期鉴定40-41
• 2.4.2 大鼠子宫内膜的HE染色及厚度测定41-42
• 2.5 本章小结42-43
• 第三章 枸橼酸氯米芬对子宫内膜增殖的机制43-59
• 引言43-46
• 3.1 试验方案46
• 3.2 试验材料46-47
• 3.2.1 大鼠分组及模型建立47
• 3.2.2 主要试验试剂47
• 3.3 试验方法47-53
• 3.3.1 大鼠给药47
• 3.3.2 子宫获取47
• 3.3.3 线粒体蛋白分离47-48
• 3.3.4 Western blotting检测凋亡相关通路48-49
• 3.3.5 实时荧光定量PCR(RT-PCR)49-53
• 3.4 统计学方法53
• 3.5 实验结果与分析53-57
• 3.5.1 Western blot结果分析53-56
• 3.5.2 RNA提取56
• 3.5.3 琼脂糖凝胶电泳56-57
• 3.5.4 RT-PCR检测57
• 3.6 本章小结57
• 3.7 讨论57-59
• 第四章 雌二醇缓解枸橼酸氯米芬抑制子宫内膜增殖及机制59-70
• 前言59-61
• 4.1 实验方案61
• 4.2 试验材料61-64
• 4.2.1 大鼠分组及模型建立61
• 4.2.2 主要实验试剂61
• 4.2.3 大鼠给药61-62
• 4.2.4 大鼠发情周期鉴定62-64
• 4.2.5 Western blotting检测凋亡相关通路64
• 4.3 统计学处理64-65
• 4.4 实验结果分析65-68
• 4.4.1 大鼠发情周期鉴定65
• 4.4.2 Western blot结果分析65-68
• 4.5 本章小结68
• 4.6 讨论68-70
• 第五章 总结与讨论70-75
• 致谢75-76
• 参考文献76-84
• 附录A84

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 黄晓燕;宫颈粘液的分泌和精子-宫颈粘液相互作用与克罗米芬关系研究进展[J];国外医学(计划生育分册);1997年01期

2 张敖;;枸橼酸氯米芬胶囊与来曲唑在多囊卵巢综合征患者促排卵治疗中的对比研究[J];实用药物与临床;2012年12期

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本文编号：764787