米诺地尔多克隆抗体的制备及其酶联免疫检测方法的建立

发布时间：2017-09-05 10:11

  本文关键词：米诺地尔多克隆抗体的制备及其酶联免疫检测方法的建立

  更多相关文章： 米诺地尔 人工抗原 多克隆抗体 ELISA

【摘要】：米诺地尔(minoxidil)系血管扩张药的一种。由于局部长期使用其可刺激毛发增生,故美国FDA于1988年批准该药外用治疗男性雄激素性脱发。米诺地尔虽然仅外用于局部,但仍存在轻度皮炎、眩晕、刺激性过敏,面部和四肢多毛症等不良反应,使用不慎会刺激和灼伤眼部。因此,我国《化妆品卫生规范》(2007)明令禁止在化妆品中添加米诺地尔,包括日用洗发、护发类化妆品。但一些生产商为片面追求功效、牟取暴利,仍违规在洗发护发类化妆品中添加米诺地尔。然而,目前国内尚无关于洗发护发类化妆品中米诺地尔及其盐和衍生物的检测方法与标准。有紫外分光光度法和高效液相色谱法测定洗剂和血浆中的米诺地尔个别文献,但由于其方法尚不成熟而使得应用受限,米诺地尔快速专属的检测方法亟待发展。酶联免疫法(enzyme-linked immunosorbent assy,ELISA)具有检测迅速、方便、灵敏、特异等特点,近年来,其在药物残留领域方面的应用受到关注。本研究旨在制备出具有良好免疫原性的米诺地尔人工抗原及其多克隆抗体并初步建立米诺地尔的酶联免疫检测方法。由于米诺地尔为小分子物质,不具备免疫原性,必须应用蛋白链接技术,将米诺地尔与牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)进行偶联,制备出人工抗原Minoxidil-BSA,经紫外光谱分析法(UV)、SDS-PAGE电泳法对其进行鉴定后,用Minoxidil-BSA免疫BALB/C小鼠,制备多克隆抗体(p Ab),鉴定抗血清的效价;进而系统建立米诺地尔的酶联免疫检测法。实验数据表明:Minoxidil-BSA与BSA的紫外光谱扫描结果相比,发生了明显的改变,Minoxidil-BSA与BSA的电泳条带相比,也发生了明显的改变,表明人工抗原合成成功。用Minoxidil-BSA免疫BALB/C小鼠,其抗血清效价为1:12800,竞争ELISA法结果证明抗血清对米诺地尔的敏感性较好,通过方阵滴定法确定的最佳工作浓度为包被原浓度1:200和抗体稀释倍数1:3200。建立的米诺地尔酶联免疫检测法研究表明:Minoxidil质量浓度在0.001-10μg/ml范围内,与吸光度呈良好的线性关系,其标准方程为y=-0.0823x+0.938(R2=0.9811)。本研究成功制备出了米诺地尔人工抗原及其多克隆抗体,建立了米诺地尔的酶联免疫检测方法。相关研究结果,不仅为进一步发展米诺地尔的免疫胶体金检测方法奠定了坚实基础,同时也为米诺地尔残留的免疫学分析和快速、准确的检测提供了切实可行的技术支持。
【关键词】：米诺地尔 人工抗原 多克隆抗体 ELISA
【学位授予单位】：河北北方学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R943;R927
【目录】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 英文缩写9-11
• 前言11-13
• 材料与方法13-25
• 结果25-30
• 附图30-38
• 附表38-43
• 讨论43-47
• 结论47-48
• 参考文献48-53
• 综述 小分子人工抗原合成及多克隆抗体制备的研究进展53-65
• 参考文献60-65
• 致谢65-66
• 个人简历66

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 王建华;张冲;;小分子抗原人工合成进展[J];应用化学;2011年04期

，

本文编号：797352