ABCC2基因过表达细胞株的建立及鉴定

发布时间：2017-09-10 15:52

  本文关键词：ABCC2基因过表达细胞株的建立及鉴定

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【摘要】：目的构建携带ABCC2基因的慢病毒载体,转染HEK293细胞,筛选出稳定过表达ABCC2基因的细胞株并进行鉴定,为体外实验确定与多药耐药相关蛋白2(MRP2)外排转运相关的底物药物及其转运机制提供细胞模型。方法根据Gen Bank提供的ABCC2基因c DNA序列设计引物,PCR扩增该基因并将其连接至慢病毒载体PZE-LV105,包装病毒并感染HEK293细胞。用嘌呤霉素进行筛选得到过表达ABCC2基因的稳转细胞株,通过基因测序、实时荧光定量PCR(RTQ-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)对稳转细胞进行鉴定。结果测序结果证明重组慢病毒过表达载体所携带的ABCC2基因序列与GenBank提供的ABCC2序列一致;RTQ-PCR分析结果显示转染了ABCC2基因的HEK293细胞中MRP2的mRNA相对表达比正常HEK293细胞和空白载体对照HEK293细胞高出约320倍;蛋白免疫印迹试验显示,转染了ABCC2基因的HEK293细胞中MRP2蛋白表达水平比正常HEK293细胞和空白载体对照HEK293细胞高出约150倍。结论该实验成功构建了稳定过表达ABCC2基因的细胞株,该细胞株可用于初步筛选确定MRP2的特异性外排转运底物及其转运机制。
【作者单位】： 武汉大学人民医院药学部;
【关键词】： ABCC基因 过表达 慢病毒载体 HEK细胞
【分类号】：R96
【正文快照】： ABCC2基因编码的蛋白质是一种ATP结合盒转运蛋白,一般称作ABCC2转运蛋白或者多药耐药相关蛋白2(MRP2)。该蛋白主要分布在肝脏、胆囊、肾脏、小肠和结肠等组织细胞[1],负责外排转运特异性底物,尤其在很多治疗性药物和有毒性外源性物质的胆汁排泄中发挥重要作用[2-4]。虽然AB-CC

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1 辛华雯;刘慧明;李元启;黄晖;赵丽;余爱荣;李罄;吴笑春;李维亮;熊磊;;ABCC2基因多态性与肾移植受者环孢素所致肝功能异常的相关性研究[J];中国临床药理学与治疗学;2013年07期

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本文编号：825199