高效液相色谱法同时测定微生物酶法产L-丙氨酰-L-谷氨酰胺反应体系中5种物质及其样品处理方法对色谱峰的影响分析

发布时间：2017-09-17 17:01

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【摘要】：建立了同时测定微生物酶法产L-丙氨酰-L-谷氨酰胺反应体系中5种物质(L-丙氨酰-L-谷氨酰胺、L-谷氨酰胺、L-丙氨酸甲酯、L-谷氨酸、L-丙氨酰-L-丙氨酸)的高效液相色谱分析方法。考察了样品处理中存在的发酵液、磷酸、三氯乙酸对色谱峰的影响,建立了一种对色谱峰无干扰的样品处理方法。选用邻苯二甲醛(OPA)为衍生剂,以在线衍生的方式实现了标准品或样品的柱前自动衍生。选用C18色谱柱进行分离,柱温40℃,以12.5 mmol/L磷酸盐缓冲液(88%,pH 7.4)与12%乙腈为流动相进行等度洗脱,流速为1 m L/min,在λex=338 nm,λ_(em)=450 nm下进行荧光检测,外标法定量。结果显示,该色谱条件下5种物质的测定线性范围广,相关系数均大于0.999 4。低、中、高3组加标水平下的回收率为93.5%~104.9%,相对标准偏差(RSD)小于7%。1日内间隔2 h进行6次进样,5种物质保留时间的RSD均小于0.12%,峰面积RSD均小于1.2%。该方法操作简单,分离度与灵敏度高,定量精确,重复性好。
【作者单位】： 江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室糖化学与生物技术教育部重点实验室;
【关键词】： 高效液相色谱法 柱前自动化衍生 L-丙氨酰-L-谷氨酰胺反应体系 样品处理方法
【基金】：国家自然科学基金(30970058,21176106) 江苏省自然科学基金(BK2012554)
【分类号】：R927;O657.72
【正文快照】： L-丙氨酰-L-谷氨酰胺(L-Alanyl-L-glutamine,L-Ala-L-Gln)是一种由L-丙氨酸与L-谷氨酰胺两种氨基酸缩合形成的二肽,简称丙谷二肽。作为一种条件必需氨基酸[1],L-谷氨酰胺(L-Gln)在医药临床领域应用广泛,可作为糖异生和尿素合成的原料[2]、神经递质的前体[3],可促进损伤组织的

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本文编号：870603