手性钌（Ⅱ）配合物Λ-OMe靶向抗肿瘤活性及作用机制研究

发布时间：2017-10-07 06:22

  本文关键词：手性钌（Ⅱ）配合物Λ-OMe靶向抗肿瘤活性及作用机制研究

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【摘要】：目的：端粒酶是影响肿瘤细胞复制增殖的重要标志物,肿瘤的无限增殖与端粒酶激活或端粒维持机制的改变有关。本文从端粒及端粒酶活性、细胞周期、细胞凋亡方面研究手性钌(Ⅱ)配合物对肿瘤细胞的作用途径,阐明手性异构体对肿瘤细胞的特异性选择作用,明确其抗肿瘤作用靶点,为开发抑制端粒酶活性的高效低毒的抗肿瘤药物提供实验和理论基础。方法：1.筛选细胞和手性钌(Ⅱ)配合物。培养细胞,通过MTT法检测相应细胞和药物。用筛选出的药敏作用最好的手性钌(Ⅱ)配合物和肿瘤细胞进行下一步检测。2.端粒及端粒酶活性检测。通过Western Blott ing法检测手性钌(Ⅱ)配合物对端粒相关蛋白Trf1.Trf2的表达；通过TRAP-PCR银染法检测手性钌(Ⅱ)配合物对端粒酶活性的影响。3.细胞周期检测。通过PI单染法检测手性钌(Ⅱ)配合物对肿瘤细胞周期阻滞的影响；通过RT-PCR检测其对周期重要调控因子p21mRNA表达的影响。4.细胞凋亡检测。通过hoechest33342染色.Tunnel法检测细胞凋亡的形态学表现；通过Annexin V-FITC/PI双染法定量检测细胞凋亡；通过RT-PCR检测手性钌(Ⅱ)配合物对细胞凋亡相关基因Caspase-3、Bcl-2、Bax mRNA表达的影响。结果：1.MTT检测：手性钌(Ⅱ)配合物△/∧-[Ru(phen)2p-MopIp]2+(△/∧-OMe)及外消旋体[Ru(phen)2p-MpIp]2+(dl-OMe)对被检测的肿瘤细胞都有疗效,其中手性钌(Ⅱ)配合物∧-OMe对胃癌细胞MGC-803最为敏感。∧-OMe作用MGC-80348小时的IC50为7.4 μ g/ml,且∧-OMe诱导MGC-803细胞死亡有明显的剂量和时间依赖性。2.端粒及端粒酶活性检测：手性钌(Ⅱ)配合物∧-OMe能影响端粒相关蛋白的表达并抑制端粒酶活性,且随药物浓度增高,端粒酶活性越小。∧-OMe处理MGC-803细胞48小时后,随着药物浓度的增加Trf1的蛋白表达呈现增加的趋势,Trf2蛋白的表达呈现下降的趋势；而TRAP-PCR银染法检测显示未加药物处理组(A条带)端粒酶条带最多且颜色最深；阴性对照组(B条带)条带最少,颜色最浅；C、D、E条带分别为5μg/ml,10 μg/ml,20 μ g/ml浓度组,随着药物浓度增高,条带减少,颜色变浅。3.细胞周期检测：手性钌(Ⅱ)配合物∧-OMe能阻滞细胞周期,且周期阻滞在G0/G1期。加入配合物∧-OMe 24小时后,G0/G1期细胞数随着药物浓度增加比例增高；S期细胞数随着药物浓度增加而降低。周期相关基因结果显示,在同一时间内,随药物浓度增高,p21 mRNA的表达上调,但在24和48小时结果比较,无明显的时间依赖性。4.细胞凋亡检测：手性钌(Ⅱ)配合物人-OMe能促进肿瘤细胞凋亡,且有时间、剂量依赖性。手性钌(Ⅱ)配合物人-OMe处理MGC-803细胞48小时后,未加药物处理组细胞生长良好,药物处理组细胞出现细胞数量减少,核皱缩,核碎裂、凋亡小体等凋亡细胞形态,随药物作用时间延长及浓度增高,细胞的凋亡率增高；手性钌(Ⅱ)配合物随着药物浓度升高,MGC-803细胞的Bax mRNA/Caspase-3mRNA表达上调,Bcl-2mRNA的表达下调。结论：手性钉(Ⅱ)配合物∧-OMe对胃癌细胞MGC-803具有明显的抗肿瘤作用,其机制主要包括：1.阻滞细胞周期以抑制MGC-803细胞的增殖,周期阻滞在G0/G1期。2.调节端粒相关蛋白,进而抑制端粒酶活性,阻滞端粒延伸,阻碍肿瘤细胞增殖。3.调节凋亡相关基因的表达,从而诱导MGC-803细胞凋亡以达到抗肿瘤目的。
【关键词】：手性钌(Ⅱ)配合物∧-OMe 端粒酶 细胞周期 凋亡
【学位授予单位】：广州中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R96
【目录】：

• 摘要3-5
• Abstract5-10
• 引言10-11
• 第一部分 文献研究11-24
• 第一章 肿瘤治疗的现状研究11-18
• 1 端粒、端粒酶与肿瘤治疗的现状研究11-13
• 2 细胞周期与肿瘤治疗的现状研究13-14
• 3 细胞凋亡与肿瘤治疗的现状研究14-16
• 4 抗肿瘤作用的信号通路研究16-18
• 第二章 手性钌(Ⅱ)配合物与肿瘤的研究18-23
• 1 手性钌(Ⅱ)配合物的结构18
• 2 手性钌(Ⅱ)配合物的抗肿瘤活性研究18-19
• 3 手性钌(Ⅱ)配合物的抗肿瘤机制研究19-23
• 3.1 手性钌(Ⅱ)配合物抗肿瘤作用靶点的研究19-23
• 第三章 本课题的选题意义和研究目23-24
• 第二部分 实验研究24-50
• 第一章 强效药物及敏感细胞株筛选实验24-28
• 1 材料与仪器24-25
• 2 实验方法25-26
• 3 实验结果26-28
• 4 讨论28
• 第二章 抑制端粒酶活性实验28-35
• 1 材料与仪器28-30
• 2 实验方法30-33
• 3 实验结果33-35
• 4 讨论35
• 第三章 周期阻滞实验35-40
• 1 材料与仪器35-36
• 2 实验方法36-38
• 3 实验结果38-39
• 4 讨论39-40
• 第四章 细胞凋亡实验40-50
• 1 材料与仪器40-42
• 2 实验方法42-43
• 3 实验结果43-48
• 4 讨论48-50
• 结语50-52
• 参考文献52-66
• 附录66-68
• 研究生就读期间发表论文情况68-69
• 致谢69-70
• 统计学审核证明70

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本文编号：987408