甲醛在有无苯作用下对小鼠血液毒性的研究

发布时间：2017-10-10 08:24

  本文关键词：甲醛在有无苯作用下对小鼠血液毒性的研究

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【摘要】：目的：甲醛是一种广泛存在于工厂和环境中的高活性空气污染物,可引发器官毒性和各种疾病。大量的流行病学和一些动物实验均显示甲醛可导致白血病,尤其是骨-髓性的白血病,但甲醛致白血病的详细致病机理尚不明确。白血病是一种发生在造血系统的恶性畸变性疾病,而造血系统的细胞增殖、分化受细胞因子等因素调控。苯作为一种已知的可诱发血液毒性的空气污染物,无论在环境中还是工厂中,常与甲醛同时出现。因而,本实验通过研究甲醛在有无苯作用下,对调控造血系统的细胞因子及相关血细胞的数量变化的影响,以探究甲醛在有无苯作用下对小鼠血液的毒性作用。方法：选30只SPF级健康状况相似的BALB/c雄性小鼠,以6只为一组的随机分为5组。动物实验的具体分组及染毒方法：(1)空白对照组(Ctrl);(2)玉米油对照组(Oil)：以浓度为5 ml/kg bw/day的玉米油进行灌胃；(3)苯单独染毒组(BZ)：以浓度为150 mg/kg bw/day的苯(玉米油为溶剂)进行灌胃；(4)甲醛单独染毒组(FA)：以浓度为3.0 mg/m3的甲醛气体,进行吸入式染毒；(5)苯和甲醛联合染毒组(BZ+FA):在暴露日的上午,先对该组小鼠进行苯(玉米油为溶剂)灌胃,之后再进行气态甲醛的吸入式暴露,苯的灌胃浓度、方式以及时间与BZ组相同,气态甲醛的暴露时间、浓度及方式和FA组一致。每天8个小时,每周五天,连续两周。染毒周期结束后,颈椎脱臼处死小鼠并进行一系列指标的测定和观察。结果：1.各组小鼠的体重总体上都呈现上升趋势,但是甲醛组与联合染毒组的增长幅度要相对缓慢,说明甲醛暴露影响了小鼠的生长发育情况。2.在甲醛单独染毒作用下,粒细胞、白细胞、淋巴细胞和单核细胞的数量都无明显变化。而苯单独作用及甲醛与苯联合作用时,这些细胞的的数量均显著下降(P0.01)(相对Ctrl和Oil这两个对照组),但是各组红细胞的数量则大致无变化,只有苯单独作用时相对玉米油组显著下降(P0.05)。3.甲醛单独作用可使细胞因子M-CSF的转录水平下降(P0.01),与苯联合后,苯加强甲醛对细胞因子M-CSF转录水平的影响(可能为苯挥发)。4.甲醛单独作用可使细胞因子G-CSF的转录水平下降(P0.01),与苯联合后,苯可消弱甲醛对细胞因子G-CSF转录水平的影响。5.甲醛单独作用可使细胞因子EPO的转录水平下降(P0.01),与苯联合后,苯可消弱甲醛对细胞因子EPO转录水平的影响。结论：一定浓度下,甲醛单独作用可在一定程度上对小鼠产生血液毒性效应,苯存在时,则可消弱甲醛的毒性作用。
【关键词】：甲醛 苯 血液毒性 细胞因子
【学位授予单位】：华中师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R114
【目录】：

• 摘要6-8
• Abstract8-12
• 1. 绪论12-24
• 1.1 甲醛及其造血毒性12-18
• 1.1.1 甲醛的概况12-14
• 1.1.2 甲醛的血液毒性研究14-18
• 1.2 苯及其造血毒性18-21
• 1.2.1 苯的概况18-20
• 1.2.2 苯的血液毒性研究20-21
• 1.3 造血系统的调控21-22
• 1.4 选题目的及意义22-24
• 2 材料与方法24-32
• 2.1 实验材料24-26
• 2.1.1 实验对象24
• 2.1.2 实验仪器24
• 2.1.3 主要实验试剂及试剂盒24-25
• 2.1.4 主要实验试剂的配制方法25-26
• 2.2 实验方法26-32
• 2.2.1 气态甲醛的发生及暴露方案26
• 2.2.2 实验动物分组及暴露方法26-28
• 2.2.3 小鼠体重的测定28
• 2.2.4 全血细胞的测定28
• 2.2.5 总RNA的提取28
• 2.2.6 将RNA反转录成cDNA28-29
• 2.2.7 RT-PCR(半定量)法测定细胞因子M-CSF、G-CSF和EPO转录水平·29-30
• 2.2.8 实时荧光定量PCR(Real-time PCR)测定细胞因子M-CSF、G-CSF和EPO转录水平30-31
• 2.2.9 实验数据统计31-32
• 3 实验结果及分析32-42
• 3.1 小鼠体重变化32-33
• 3.2 小鼠全血细胞的测定33-34
• 3.3 总RNA提取的结果34-35
• 3.3.1 骨髓中总RNA提取的质量34-35
• 3.3.2 肾脏中总RNA提取的质量35
• 3.4 RT-PCR(半定量)法测定细胞因子M-CSF、G-CSF和EPO转录水平的结果35-36
• 3.4.1 RT-PCR(半定量)法测定细胞因子M-CSF转录水平的含量35
• 3.4.2 RT-PCR(半定量)法测定细胞因子G-CSF转录水平的含量35-36
• 3.4.3 RT-PCR(半定量)法测定细胞因子EPO转录水平的含量36
• 3.5 实时荧光定量PCR(REAL-TIME PCR)测定细胞因子M-CSF、G-CSF和EPO转录水平的结果36-42
• 3.5.1 实时荧光定量PCR(Real-time PCR)的条件分析36-38
• 3.5.2 实时荧光定量PCR(Real-time PCR)测定细胞因子M-CSF转录水平含量38-39
• 3.5.3 实时荧光定量PCR(Real-time PCR)测定细胞因子G-CSF转录水平含量39-40
• 3.5.4 实时荧光定量PCR(Real-time PCR)测定细胞因子EPO转录水平含量40-42
• 4 讨论42-45
• 4.1 甲醛与苯的在生物机体内的代谢过程42-43
• 4.2 甲醛在有无苯作用下小鼠的体重变化的影响43
• 4.3 甲醛在有无苯作用下对血液细胞数量的影响43-44
• 4.4 甲醛在有无作用下对细胞因子M-CSF、G-CSF及EPO转录水平的影响44-45
• 5 结论与展望45-46
• 参考文献46-54
• 附录54-55
• 攻读学位期间论文发表情况55-56
• 致谢56

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本文编号：1005323