PAS-Na对锰致大鼠基底核神经元和星形胶质细胞氨基酸类神经递质影响的体外研究

发布时间：2017-10-20 15:19

  本文关键词：PAS-Na对锰致大鼠基底核神经元和星形胶质细胞氨基酸类神经递质影响的体外研究

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【摘要】：目的探讨对氨基水杨酸钠(PAS-Na)对体外染锰致大鼠基底核原代神经元和星形胶质细胞损伤、DNA损伤及谷氨酸（Glu）、谷氨酰胺（Gln）和甘氨酸（Gly）、γ-氨基丁酸（GABA）等氨基酸类神经递质水平影响的体外研究。 方法（1）神经元：培养至第八天的基底核神经元，分别①经0、25、50、100、200μmol/L氯化锰（MnCl2）单独作用24h。②单独给予0、5、50、500、5000μmol/L PAS-Na作用24h，在倒置相差显微镜下观察神经元形态，用MTT法测定细胞存活率。③基底核神经元随机分为正常对照组（对照组）、染锰组、低、中、高剂量PAS-Na（L-、M-、H-PAS）对照组和干预组。对照组、L-、M-、H-PAS对照组神经元给予培养液培养24h；染锰组、L-、M-、H-PAS干预组神经元暴露于含MnCl250μmol/L培养液培养24h。接着，弃掉原培养液。L-、M-、H-PAS对照组、干预组分别给予含PAS-Na50、150、450μmol/L的培养液培养24h。其余组培养液培养24h。然后，用噻唑蓝(MTT)法测定存活率，用试剂盒测定乳酸脱氢酶（LDH）漏出率、过氧化氢酶（CAT）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性，单细胞凝胶电泳技术(SCGE)测定DNA损伤，高效液相色谱(HPLC)荧光检测法测定细胞内外Glu、Gln、Gly及GABA含量。（2）星形胶质细胞：纯化鉴定后的基底核星形胶质细胞，分别①经0、125、250、500、1000μmol/L MnCl2单独作用24h。②单独给予0、5、50、500、5000μmol/L PAS-Na作用24h，在倒置相差显微镜下观察星形胶质细胞形态，用MTT法测定其存活率。③基底核星形胶质细胞被随机分为正常对照组（对照组）、染锰组、低、中、高剂量PAS-Na（L-、M-、H-PAS）对照组和干预组。对照组、L-、M-、H-PAS对照组星形胶质细胞给予培养液培养24h；染锰组、L-、M-、H-PAS干预组星形胶质细胞暴露于MnCl2500μmol/L培养液培养24h。接着，弃掉原培养液。L-、M-、H-PAS对照组、干预组分别给予含PAS-Na50、150、450μmol/L的培养液培养24h。其余组培养液培养24h。用MTT法测定细胞存活率，SCGE测定DNA损伤，用HPLC荧光检测法测定大鼠基底核星形胶质细胞内外Glu、Gln及Gly含量。 结果（1）神经元：①锰可引起基底核神经元形态损伤及存活率降低，呈一定的剂量反应关系；②高浓度（5000μmol/L）PAS-Na可损伤基底核神经元形态，使其存活率降低；③染锰组基底核神经元胞体肿胀、皱缩、突起减少。与染锰组比较，L-、 M-、H-PAS干预组神经元上述变化有所减轻，H-PAS干预组作用效果较好。与对照组比较，染锰组神经元存活率降低，L-、M-、H-PAS干预组神经元存活率比染锰组高（P＜0.05）；染锰组LDH漏出率比对照组高；L-、M-PAS干预组LDH漏出率比染锰组低（P＜0.05）。染锰组GSH-Px和CAT活性都比对照组低；M-PAS干预组GSH-Px活性和M-、H-PAS干预组CAT活性比染锰组高（P＜0.05）。染锰组尾部DNA百分率、Olive尾距均大于对照组；L-、M-、H-PAS干预组神经元彗星尾部DNA百分率、Olive尾距比染锰组低（P＜0.05）。染锰组神经元内Glu、Gln含量比对照组低，GABA、Gly含量比对照组高；L-、M-、H-PAS干预组Glu、Gly和H-PAS干预组GABA含量比染锰组低，L-、H-PAS干预组Gln含量比染锰组高（P＜0.05）。染锰组神经元外Glu、Gln含量比对照组低，Gly含量比对照组高；L-、M-、H-PAS干预组Gly含量比染锰组低，M-PAS干预组Glu含量比染锰组高（P＜0.05）。（2）星形胶质细胞：①锰浓度为250μmol/L以上可引起基底核星形胶质细胞形态损伤及存活率下降，有一定的剂量反应趋势；②单纯PAS-Na对基底核星形胶质细胞形态及存活率无明显影响；③染锰组基底核星形胶质细胞胞体肿胀、皱缩。与染锰组比较，L-、 M-、H-PAS干预组星形胶质细胞上述变化有所减轻。染锰组细胞存活率比对照组低，， M-、H-PAS干预组细胞存活率比染锰组高（P0.05）。染锰组星形胶质细胞的彗星尾部DNA百分率、Olive尾距均大于对照组；L-、M-、H-PAS干预组神经元彗星尾部DNA百分率和H-PAS干预组神经元彗星Olive尾距比染锰组低（P0.05）。染锰组星形胶质细胞内Glu、Gly含量比对照组高，Gln含量比对照组低。L-、M-、H-PAS干预组Glu和M-、H-PAS干预组Gly含量比染锰组低， H-PAS干预组Gln含量比染锰组高（P0.05）。染锰组细胞外Glu、Gly含量比对照组高，Gln含量低于对照组。L-、M-、H-PAS干预组Glu、Gly含量比染锰组低，L-、M-、H-PAS干预组Gln含量高于染锰组（P0.05）。 结论体外染锰对大鼠原代基底核神经元和星形胶质细胞损伤明显，并引起DNA损伤及氨基酸类神经递质水平改变异常，PAS-Na对锰致神经元、星形胶质细胞的损伤、DNA损伤及氨基酸类神经递质的毒性影响有干预作用。
【关键词】：对氨基水杨酸钠 锰 大鼠 基底核 神经元 星形胶质细胞 氨基酸类神经递质 体外研究
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R114
【目录】：

• 英文缩略词5-6
• 摘要6-9
• ABSTRACT9-14
• 前言14-16
• 第一部分 PAS-Na 对染锰大鼠原代基底核神经元损伤的影响16-36
• 1 材料与方法16-21
• 1.1 主要仪器和试剂16-18
• 1.2 新生大鼠原代基底核神经元体外培养及处理18-19
• 1.3 基底核神经元鉴定19
• 1.4 MTT 法测定细胞存活率19-20
• 1.5 单细胞凝胶电泳技术（SCGE）测定 DNA 的损伤20
• 1.6 细胞培养液及细胞内 LDH 和细胞内 GSH-Px、CAT 活性20-21
• 1.7 HPLC 参考文献[31]，并做改良21
• 2 统计学分析21-22
• 3 结果22-33
• 3.1 体外染锰致大鼠原代基底核神经元损伤22-24
• 3.2 PAS-Na 对大鼠原代基底核神经元的影响24-26
• 3.3 PAS-Na 对染锰大鼠原代基底核神经元损伤的影响26-33
• 4 讨论33-36
• 第二部分 PAS-Na 对染锰大鼠星形胶质细胞损伤的影响36-50
• 1 材料与方法36-38
• 1.1 主要仪器和试剂36
• 1.2 新生大鼠基底核星形胶质细胞体外培养及处理36-37
• 1.3 基底核星形胶质细胞鉴定37
• 1.4 MTT 法测定细胞存活率37-38
• 1.5 SCGE 测定 DNA 的损伤38
• 1.6 HPLC 参考文献，并做改良38
• 2.统计学分析38
• 3 结果38-47
• 3.1 体外染锰致大鼠基底核星形胶质细胞损伤38-40
• 3.2 PAS-Na 对大鼠星形胶质细胞的影响40-42
• 3.3 PAS-Na 对染锰大鼠基底核星形胶质细胞损伤的影响42-47
• 4 讨论47-50
• 结论50-51
• 参考文献51-59
• 综述59-85
• 参考文献70-85
• 致谢85-86
• 研究生期间发表的文章86

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前9条

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本文编号：1067894