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PAS-Na对锰致大鼠海马炎症反应的影响

发布时间:2017-10-30 06:04

  本文关键词:PAS-Na对锰致大鼠海马炎症反应的影响


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【摘要】:[目的]探讨对氨基水杨酸钠(PAS-Na)对锰致大鼠血清、海马炎症反应,学习记忆能力的影响[方法]120只雄性SD大鼠适应性喂养1周后,按体重随机分为4周动物实验分组(正常对照组、染锰组)和8周动物实验(正常对照组、染锰组、PAS干预组、PAS对照组),每组20只。观察期4周,染锰组腹腔注射(ip)MnCl2·4H20 15mg/kg,正常对照组ip等容量生理盐水,每日1次,每周5天,连续4周;观察期8周,染锰组腹腔注射(ip)MnCl2·4H20 15mg/kg,正常对照组ip等容量生理盐水,PAS-Na干预组腹腔注射(ip)MnCl2·4H20 15mg/kg,然后背部皮下注射(sc)PAS-Na 160mg/kg,PAS对照组背部皮下注射(sc)等容的生理盐水。每日1次,每周5天,连续8周。末次染毒或治疗结束后,进行Morris水迷宫实验测定大鼠学习记忆能力(每组随机选取10只);Morris水迷宫实验结束后马上处死,心脏采血,快速分离大脑海马,石墨炉原子吸收光谱法测定血锰含量;酶联免疫吸附测定法检测血和海马TNF-αIL-1β、IL-6和PGE2炎症因子含量;PCR法检测大鼠海马IL-1β,IL-6,COX2,TNF-α和iNOS mRNA表达;每组取5只动物进行4%多聚甲醛固定液经心脏内灌注固定,后分离大脑,免疫组化法测定大鼠海马GABA, GFAP, BCL-2/BAX, Caspese3阳性细胞表达量[结果](1)染锰组大鼠的逃避潜伏期和游泳路程均长于较对照组大鼠(P0.05);PAS-Na干预后,大鼠逃避潜伏期在明显较染锰组缩短(P0.05);染锰组大鼠在第6天空间记忆的穿环次数、第三象限时间百分比和第三象路程限百分比均大于对照组大鼠(P0.05),经PAS-Na干预,PAS干预组大鼠穿环次数明显增加(P0.05);(2)染锰组大鼠血锰含量比对照组高(P0.05)。血锰浓度与染毒时间程时间剂量效应关系。PAS-Na干预组大鼠血锰浓度均低于染锰组(P0.05)。(3)染锰组大鼠血清IL-1 p,IL-6,PGE2,TNF-α含量与对照组比较,均明显升高(P0.05)。经PAS-Na干预后,PAS-Na组IL-1β,TNF-α含量明显降低(P0.05);(4)染锰组大鼠海马IL-1β,IL-6,PGE2,TNF-α含量均高于对照组(P0.05)。经PAS-Na干预后,PAS-Na干预组IL-1p,IL-6,PGE2,TNF-α含量明显降低,差异有统计学意义(P0.05);(5)与对照组比较,染锰组大鼠海马IL-1p,IL-6,COX2,TNF-α和iNOS mRNA表达量均明显升高(P0.05);PAS-Na干预后,海马IL-6,COX2,TNF-α和iNOS mRNA表达量均升高(P0.05);(6)染锰4、8周组GFAP、Caspese3细胞阳性表达量增加(P0.05);BCL-2/BAX比值下降染(P0.05)。锰8周大鼠经PAS-Na干预后,GFAP、Caspese3细胞阳性表达量降低(P0.05);BCL-2/BAX比值升高(P0.05)。[结论](1)过量锰暴露可致大鼠全血Mn升高,生长发育缓慢,脏器损伤(心脏、肝脏、脾脏和肾脏),且随暴露期限的增加而加重;(2)过量锰暴露可致大鼠的学习记忆能力降低,这可能与锰致大鼠血清和海马发生炎症反应和促进细胞凋亡有关。(3)PAS-Na对锰致上述损伤有拮抗作用,这可能与PAS-Na的螯合促排锰作用和抗炎作用有关。
【关键词】:对氨基水杨酸钠 锰中毒 炎症因子 海马
【学位授予单位】:广西医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2016
【分类号】:R114
【目录】:
  • 个人简历3-7
  • 英文缩略词7-9
  • 摘要9-11
  • ABSTRACT11-14
  • 前言14-17
  • 1 材料与方法17-29
  • 1.1 主要仪器和试剂17-18
  • 1.1.1 主要仪器17
  • 1.1.2 主要试剂17-18
  • 1.2 实验动物的饲养及染毒模型的建立18-19
  • 1.2.1 实验动物的饲养18
  • 1.2.2 实验动物染毒模型的建立18-19
  • 1.3 Morris水迷宫实验19-20
  • 1.3.1 Morris水迷宫准备19
  • 1.3.2 Morris水迷宫测试19-20
  • 1.4 动物样本的采集及处理20-21
  • 1.4.1 血样的采集及处理20
  • 1.4.2 大鼠海马的采集及处理20
  • 1.4.3 大鼠海马免疫组化法样本的采集及处理20-21
  • 1.5 指标测定21-25
  • 1.5.1 体重测定及一般情况21
  • 1.5.2 脏器比测定21
  • 1.5.3 大鼠血锰测定21-23
  • 1.5.3.1 配液方法21-22
  • 1.5.3.2 石墨炉原子吸收分光光度法测定血锰值22-23
  • 1.5.4 大鼠血清、海马炎症因子的测定23-25
  • 1.5.4.1 IL-1β ELISA测定24-25
  • 1.5.4.2 IL-6 ELISA测定25
  • 1.5.4.3 PGE2 ELISA测定25
  • 1.5.4.4 TNF-α ELISA测定25
  • 1.6 大鼠海马IL-1β,IL-6,COX2,TNF-α和iNOS mRNA表达的测定25-28
  • 1.6.1 引物合成25-26
  • 1.6.2 RNA提取26-27
  • 1.6.3 RNA纯度及完整性检验27
  • 1.6.4 cDNA的合成(RNA逆转录)27-28
  • 1.6.5 Real-time PCR28
  • 1.7 免疫组化法检测海马GFAP,BCL-2/BAX,Caspese3阳性细胞表达量28-29
  • 2. 统计学处理与分析29
  • 3. 结果29-42
  • 3.1 PAS-Na对染锰大鼠生长发育的影响29-32
  • 3.1.1 大鼠一般表现29-30
  • 3.1.2 大鼠体重测定30-32
  • 3.1.3 大鼠脏器系数测定32
  • 3.2 PAS-Na对染锰大鼠空间学习记忆的影响32-36
  • 3.2.1 PAS-Na对染锰大鼠平均逃避潜伏期的影响32-33
  • 3.2.2 PAS-Na对染锰大鼠平均游泳路程的影响33-34
  • 3.2.3 PAS-Na对染锰大鼠平均游泳路程的影响34-36
  • 3.3 PAS-Na对染锰大鼠血锰的影响36-37
  • 3.4 PAS-Na对染锰大鼠血清炎症因子的影响37
  • 3.5 PAS-Na对染锰大鼠海马炎症因子的影响37-38
  • 3.6 PAS-Na对染锰大鼠海马IL-1β、IL-6、COX2、TNF-α和iNOS mRNA表达的影响38-39
  • 3.7 PAS-Na对染锰大鼠海马GFAP,BCL-2/BAX,Caspese3阳性细胞表达量的影响39-42
  • 4. 讨论42-46
  • 5. 结论46
  • 参考文献46-57
  • 附录57-70
  • 综述70-96
  • 参考文献80-96
  • 致谢96-97
  • 发表论文97

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本文编号:1116402


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