三种天然食品功能因子抗氧化活性的多元评价

发布时间：2017-11-19 22:05

  本文关键词：三种天然食品功能因子抗氧化活性的多元评价

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【摘要】：目的：活性氧引发的机体氧化应激已被证实与人体多种慢性疾病密切相关。具有抗氧化活性的天然食品功能因子能在一定程度上减少机体氧化损伤，其抗氧化活性评价方法对其研究开发至关重要。虽然目前已有抗氧化活性细胞筛选（CAA）等方法用于快速评价功能因子的抗氧化活性，但不能全面反映功能因子的时-量-效关系。本研究利用与常见慢性疾病密切相关的H2O2、高浓度葡萄糖、油酸作为诱导剂，造成不同程度细胞氧化损伤，分别添加食品功能因子硫辛酸、槲皮素、白藜芦醇进行干预，通过多种生理生化指标评价其抗氧化活性及其时-量-效关系，并比较它们在不同损伤环境下的作用差异，探究三种植物营养素干预氧化损伤的作用特点，为功能因子活性评价及开发利用提供理论依据。 方法：选用人肝癌细胞株（HepG2）作为实验细胞，以过氧化氢、高糖、油酸作为诱导剂，通过对细胞状态的不同影响程度，选择适宜浓度确定为造模浓度。分别添加硫辛酸、槲皮素、白藜芦醇，在不同损伤时间、保护时间、作用浓度等影响因素下对损伤细胞进行干预，采用噻唑蓝（MTT）法检测损伤细胞存活率、荧光探针（DCFH-DA）法检测细胞自由基水平，测定细胞氧化还原状态相关指标。主成分分析法处理实验数据，，在相同模型下比较三种功能因子的作用效果。采用荧光定量PCR测定相关基因表达水平，探讨发生保护作用、量效关系的可能机制。 结果：三种诱导剂通过降低细胞存活率、升高自由基水平，代偿性地刺激模型氧化还原系统，造成不同程度细胞氧化损伤。100μM H2O2作用细胞4h造成急性细胞损伤，33mM高糖和0.5mM油酸损伤相对缓和，作用细胞48h以上时造成显著损伤。在不同损伤水平下，功能因子能不同程度缓解氧化损伤。短期内，三种抗氧化剂低浓度均不足以改善损伤，高浓度改善效果显著。长期作用时，各浓度硫辛酸均能保持良好保护作用；适宜浓度白藜芦醇和槲皮素有良好抗氧化作用，但高浓度白藜芦醇出现活性转化。100μM硫辛酸在24h之内的H2O2损伤模型中抗氧化作用最强，10μM白藜芦醇在48h高糖损伤中起最佳抗氧化作用，50μM白藜芦醇作用72h时，在高糖和油酸模型中均发生促氧化作用。10μM槲皮素在48h油酸损伤模型中起最佳抗氧化作用。抗氧化剂在最佳抗氧化浓度下干预损伤，能上调Nrf2相关基因表达、下调促氧化基因表达，缓解模型氧化应激程度，改善细胞氧化还原状态。 结论：在不同程度细胞损伤模型中评价硫辛酸、白藜芦醇、槲皮素的作用，初步得到三种功能因子针对不同诱导剂造成氧化损伤的时-量-效关系，体现不同能量水平的损伤状况下，研究抗氧化剂的种类、需要量、活性可能会发生的变化，并能直观评价其抗氧化作用的时-量-效关系。
【学位授予单位】：江南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R151.3

【参考文献】

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本文编号：1205044