镉经内质网应激诱导肝细胞自噬及其与凋亡关系的初步研究

发布时间：2018-04-14 09:08

  本文选题：镉 + WRL68　； 参考：《南京师范大学》2014年硕士论文

【摘要】：本实验室已有研究证明了低浓度镉(10μM)可以诱导肝细胞自噬,并没有诱导细胞凋亡。但是镉诱导肝细胞自噬与内质网应激的关系当前还不清楚。本研究旨在探究镉是否经内质网应激引起WRL68细胞自噬,以及在WRL68细胞中自噬与凋亡的关系。本研究分为三部分：①探究镉诱导WRL68细胞自噬与内质网应激之间的关系；②分析胞内钙稳态的变化对镉经内质网应激诱导细胞自噬的影响；③分析WRL68细胞自噬与凋亡的关系。 本实验运用细胞培养、透射电子显微镜、Western blot、流式细胞术等细胞和分子生物学技术,研究分析了低浓度(0～10μM)镉诱导人肝细胞的自噬标志蛋白LC3B-Ⅱ/Ⅰ和内质网应激标志蛋白GRP78的表达；探究胞内钙离子与镉诱导的细胞自噬的关系；用流式细胞术和Western blot检测3-MA(自噬抑制剂)对WRL68细胞自噬与凋亡的影响,分析镉致肝细胞自噬和凋亡之间的关系。具体实验结果如下： 1.镉经内质网应激途径诱导WRL68细胞自噬 在本实验室研究的基础上,WRL68细胞暴露于低浓度镉后,细胞形态基本完好,但发生细胞自噬。在透射电镜下观察到自噬泡和内质网肿胀,并有脱颗粒现象；加入内质网应激抑制剂4-PBA后,发现GRP78和LC3B-Ⅱ/Ⅰ的表达量减少；GFP-LC3B在荧光显微镜下点状聚集也减少。 2.钙稳态变化与内质网应激引起的WRL68自噬的关系 WRL68细胞暴露于低浓度镉(0～10gM)12h,引起细胞自噬,同时用酶标仪检测到胞内钙离子浓度升高；当加入内质网钙库抑制剂2-APB后,Western blot检测到GRP78和LC3B-Ⅱ/Ⅰ的表达量减少。 3.镉诱导WRL68细胞的自噬与凋亡的关系 WRL68细胞加入自噬抑制剂3-MA后,流式细胞仪检测结果显示,加入3-MA后细胞凋亡率增高,Western blot检测发现LC3B-Ⅱ/Ⅰ的表达量减少,而Cleaved Caspase-3的表达量增加。 本研究在WRL68细胞暴露于低浓度镉(0～10μM)后细胞形态基本完好的基础上进行研究。低浓度镉可以经内质网应激途径诱导WRL68细胞自噬,且胞内钙离子参与了内质网应激引起的自噬,此外,加入3-MA后细胞凋亡增加。
[Abstract]:It has been demonstrated in our laboratory that low concentration of cadmium (10 渭 M) can induce autophagy of hepatocytes, but do not induce apoptosis.However, the relationship between cadmium induced hepatocyte autophagy and endoplasmic reticulum stress is unclear.The aim of this study was to investigate whether cadmium induced autophagy of WRL68 cells through endoplasmic reticulum stress and the relationship between autophagy and apoptosis in WRL68 cells.This study was divided into three parts: 1 to explore the relationship between cadmium induced autophagy and endoplasmic reticulum stress in WRL68 cells. 2 to analyze the effect of intracellular calcium homeostasis on cadmium induced autophagy by endoplasmic reticulum stress. 3 to analyze the relationship between autophagy and apoptosis of WRL68 cells.Cell culture, transmission electron microscopy (TEM), Western blot, flow cytometry and other cell and molecular techniques were used in this study.The expression of autophagy marker protein LC3B- 鈪，

本文编号：1748631