不同类型内分泌干扰物对神经细胞影响的联合作用及其机制研究

发布时间：2018-05-21 15:42

本文选题：己烯雌酚 + 邻苯二甲酸二丁酯　；参考：《山西医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：目的:1.研究己烯雌酚(DES)、邻苯二甲酸二丁酯(DBP)、丙基硫脲嘧啶(PTU)三种类型内分泌干扰物对GT1-7神经细胞增殖的剂量效应关系;2.研究DES、DBP、PTU对GT1-7神经细胞分泌Gn RH的影响及其联合作用;3.研究DES、DBP、PTU联合暴露对GT1-7神经细胞分泌Gn RH的可能机制。方法:1.采用永生化的下丘脑GT1-7神经细胞模型,将三种受试物暴露24h后进行相关实验。选择的受试物及其浓度为:DES为0.1、1、10、100、1000μmol/L,DBP为0.01、1、10、100、1000μmol/L,PTU为0.0001、0.01、1、100、1000μmol/L,联合作用的浓度设计为DES 0.1-1000μmol/L,DBP 0.01μmol/L,PTU0.0001μmol/L。2.CCK-8法检测三种物质单独暴露和联合暴露的GT1-7细胞存活率。3.Gn RH放免试剂盒检测单独暴露组及联合暴露组细胞培养液中Gn RH的分泌量。4.Western Blot检测联合暴露组PLC、GPR54、PKC、Gn RH蛋白表达量。5.RT-PCR检测暴露组PLC、GPR54、PKC、Gn RH基因表达量。结果:1.GT1-7细胞单独暴露于DES时,各染毒组细胞存活率由110%降至4%左右,暴露于DBP时各组细胞存活率由130%降至60%左右,均表现为随浓度的增大细胞存活率呈现先增加后降低的趋势。细胞单独暴露于PTU时,各组的细胞存活率相比对照组有所增加,但基本维持在一定水平120%-135%左右。DES、DBP、PTU单独作用时,其浓度分别低于10μmol/L、100μmol/L、1000μmol/L时GT1-7细胞存活率在90%以上。而GT1-7细胞单独暴露于此三种物质时对Gn RH的分泌量的影响则表现为随DES浓度的增大呈现先增加后降低趋势,对照组2.36μg/ml,染毒组由6.26μg/ml降至2.19μg/ml;随DBP浓度的增大呈降低趋势,由对照组2.60μg/ml降至染毒组1.66μg/ml、1.95μg/ml;随PTU浓度的增大呈先增后降趋势,对照组2.3μg/ml,染毒组由3.01μg/ml降至1.46μg/ml。2.DES与PTU、DBP与PTU联合暴露时,细胞存活率随浓度增加表现为先增加后降低。相比DES单独作用体系,0.01μmol/L DBP和0.0001μmol/L PTU同时加入到0-10μmol/L DES后细胞存活率显著增加,约为126%-160%,具有统计学差异。0.01μmol/L DBP和0.0001μmol/L PTU加入DES中后,Gn RH的分泌量随DES浓度的增加呈降低趋势,表现为对照组4.23μg/ml,染毒组0.75μg/ml和1.50μg/ml。3.联合暴露时,Kisspeptins/GPR54信号通路上的各浓度组PKC蛋白表达量为1.8和1.3,各浓度组PLC蛋白表达量为1.11和1.14,及DES为0.1μmol/L的GPR54组蛋白表达量为1.1,上述这些蛋白表达量相比对照组都有所增加;而各浓度组Gn RH蛋白表达量为0.9和0.8,及DES为1μmol/L的GPR54组蛋白表达量为0.7,上述蛋白表达量相比对照组减少。而各浓度PKC基因表达量为3.9和2.8,GPR54基因表达量为2.2和1.0,PLC基因表达量为2.1和1.7,上述基因表达量相比对照组都有所增加,Gn RH基因表达量0.8和0.6,相比对照组减少。GPR54、PKC、PLC蛋白和基因表达量基本呈增大趋势,细胞内Gn RH蛋白及其基因表达量的变化趋势与培养液内Gn RH分泌量的变化趋势基本一致,呈降低趋势,这与信号通路上几种主要蛋白表达量的变化呈相反趋势。结论:1.DES、DBP、PTU在一定浓度下共同暴露对GT1-7细胞增殖呈现联合作用,根据DES浓度的不同表现为协同和拮抗效应。当0.01μmol/LDBP、0.0001μmol/L PTU和0-10μmol/L DES联合暴露对GT1-7细胞的增殖表现为协同作用,0.01μmol/L DBP、0.0001μmol/L PTU和100μmol/L DES联合暴露则对GT1-7细胞的增殖表现为协同或相加效应。2.DES、DBP、PTU在一定浓度下共同暴露对GT1-7细胞培养液中的Gn RH分泌呈现联合作用,表现为拮抗效应。3.DES、DBP、PTU联合暴露时可能促进Kisspeptins/GPR54信号通路上GPR54、PKC、PLC蛋白和基因的表达而抑制Gn RH蛋白和基因的表达,表明Kisspeptins/GPR54信号通路虽然参与了调控Gn RH分泌的过程,但仍可能还有其他信号通路参与并发挥主要作用,具体调控机制以及其他未知的相关机制还有待于进一步研究。
[Abstract]:The effects of DES , DBP and PTU on the proliferation of GT1 - 7 nerve cells were studied . Compared with the control group , the expression levels of PKC protein were 1.8 and 1.8 , and the expression level of GT1 - 7 cells increased significantly compared with the control group . The combination of DBP and PTU may promote the expression of GPRS 54 , PKC , PLC proteins and genes on the signaling pathway of Kisspephosph/ GPRS 54 to inhibit the expression of Gn RH proteins and genes , suggesting that although the Kisspepsi / GPRS 54 signal pathway is involved in the regulation of the secretion of Gn RH , there may be other signal pathways involved and play a major role , and the specific regulatory mechanism and other unknown relevant mechanisms are still to be further studied .
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R114

【参考文献】