镉预暴露增加NIH3T3细胞对双酚A诱导的DNA氧化损伤敏感作用的研究

发布时间：2018-10-10 11:39

【摘要】：目的：氯化镉(CdCl2)或双酚A(BPA)均普遍存在于我们的日常生活中,我们可以很容易的通过经口、呼吸等途径共同暴露于CdCl2与BPA。以往研究发现低剂量或无毒剂量CdCl2浓度可能会增强其他DNA毒物比如Y-射线、苯并芘等对DNA的损伤作用。然而,目前尚未见关于CdCl,与BPA复合暴露的毒性研究。本研究以无毒剂量CdCl2浓度预处理NIH3T3细胞,再施以BPA处理,探讨预暴露镉对NIH3T3细胞对BPA诱导的DNA氧化损伤的敏感性影响及其可能机制。方法：取对数期生长的NIH3T3细胞铺板,贴壁后,处或不处以5或10 μ M CdCl2 24h,然后再处或不处理2、10、50μM剂量的BPA 24h。共有4组：(1)正常对照组；(2)CdCl2处理组：单独5或10 μM CdCl,组；(3)BPA处理组：单独2、10或50μM剂量的BPA处理组；(4)CdCl2预处理+BPA组：以5或10μMCdCl2预处理24h,然后再处以2、10、50 p M剂量的BPA 24h;BPA处理24h后,分别用细胞计数试剂盒试剂盒(CCK-8)检测细胞活力；LDH细胞毒性检测试剂盒检测细胞LDH的释放；碧云天活性氧检测试剂盒测定细胞ROS含量；碱性彗星实验检测NIH3T3细胞DNA损伤,免疫荧光及Western blot检测γH2AX的表达；流式细胞术检测细胞周期的变化；TUNEL荧光染色及Western blot检测细胞的凋亡及凋亡分子PARP的表达变化。结果：①与正常对照组相比,单独CdCl2处理不引起细胞活力、LDH释放、ROS含量、彗星参数(Tail DNA%,TL、TM、OTM)、γH2AX的表达、细胞周期、TUNEL阳性细胞数及凋亡分子PARP表达水平的改变(P0.05)。②与正常对照组相比,2μM或10μM BPA单独处理不引起细胞活力、LDH释放、ROS含量、彗星参数(Tail DNA%、TL、TM、OTM)、 γH2AX的表达、细胞周期、TUNEL日性细胞及凋亡分子PARP表达水平的改变(P0.05)；然而,50 u M BPA单独处理与对照组相比,则引起了细胞活力下降、LDH释放增加、ROS产生增多、彗星参数Tail DNA%、TL、TM、OTM)显著增加、γH2AX的表达增加、G2期阻滞、TUNEL阳性细胞及PARP表达增加(P0.05)。③CdCl2预处理增加了NIH3T3细胞对BPA诱导的DNA氧化损伤的敏感性。CdCl2预处理+BPA组与单独BPA处理组相比较,5μM或10 μMCdCl2预处理均加重了10 p M或50 μM BPA引起的细胞的活力降低、LDH释放升高、ROS产生增多、彗星参数(Tail DNA%、TL、TM、OTM)增加、γH2AX的表达增加、G2期阻滞、TUNEL阳性细胞数及PARP表达升高(P0.05)；而值得注意的是,与单独2 u M BPA处理组相比,5μMCdCl2预处理尚不足以引起细胞对2 μM BPA致使的DNA损伤的敏感性,上述指标均无显著学差异(P0.05),而10 μM CdCl2预处理则能够增敏细胞对2 μM BPA诱导的细胞基因毒性(P0.05)。结论：无毒剂量5μM或10 μM CdCl2浓度预处理可以增敏NIH3T3细胞对BPA的毒性反应,加重BPA对细胞的DNA损伤,甚至可以让本来无毒的BPA剂量发挥对细胞的基因毒性。CdCl2增敏细胞对BPA诱发的DNA损伤可能与细胞内ROS产生的增加有关。结果提示,在日常生活中,暴露于镉可能会增加机体对外界环境中广泛存在的毒物如BPA的敏感性,从而进一步加重毒物对机体的损害。此项研究应该引起人们更多关于镉和双酚A暴露危险性的认识,为相关部门寻找更好的防护措施保护人们身体健康或治疗相关的中毒提供理论证据支持。然而,镉在无毒剂量浓度可以增敏细胞对BPA引起的基因毒性反应的机制尚需进一步研究。
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【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R114

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