【摘要】：铅（Pb）自然界中广泛存在，铅及其多数化合物是一种不可降解的环境污染物。铅对生物体具有多方面的毒性，可以对人体多个器官，系统造成损害。心血管疾病是目前严重危害我国人民健康和生命的一大疾病，大量研究证明，高血压是这种疾病最重要的危险因素之一。近年来，研究发现铅可以显著升高动物血压，流行病学调查也证明铅与高血压和动脉硬化具有显著的相关性。铅对高血压和动脉硬化中作用性机制研究甚少。 增殖细胞核抗原（Proliferating Cell NuclearAntigen简称PCNA）是一种与细胞DNA合成关系密切蛋白质，可以作为评价细胞增殖状态的一个良好指标。B细胞淋巴瘤/白血病-2（B cell lymphoma/lewkmia-2简称Bcl-2）是一种原癌基因，它具有抑制细胞凋亡的作用。Bax可以促进细胞凋亡，一般而言，Bcl-2和Bax是一对正负凋亡调节蛋白。Bcl-2/Bax比值越低，细胞越容易发生凋亡，否则反之。 目的：本实验是以SD大鼠低水平铅暴露为模型，观察暴露于铅40天后，SD大鼠血管组织增殖、凋亡的情况，观察铅暴露对血管危害，探讨铅对血管损伤分子生物学机制。 方法： 1实验动物 选取健康，3-4周龄，体重在99-114g的SD大鼠24只。实验动物由河北医科大学动物实验中心提供。 2实验试剂 乙酸铅终浓度为1％。 3实验分组 将SD大鼠按随机数字法分为正常组和实验组，对照组12只，实验组12只。实验组饮用含1％乙酸铅水，对照组只饮用自来水，40天后处死。 4用HE染色法观察SD大鼠血管组织学变化。 5用Western blot印记法检测SD大鼠血管中增殖蛋白PCNA、凋亡蛋白Bcl-2和Bax，结果使用计算机半定量技术进行分析。 6用免疫组织化学法检测SD大鼠血管中增殖蛋白PCNA、凋亡蛋白Bcl-2和Bax，结果使用计算机免疫组化图像分析技术进行分析。 结果： 1大鼠血管组织学变化 实验组大鼠血管管腔扩张，管壁皱褶减少，胞核皱缩，弹性膜皱褶较对照组拉直。 2大鼠血管中增殖蛋白PCNA表达的影响 Western blot结果显示，1%乙酸铅喂养40天后SD大鼠血管中的PCNA蛋白表达量与正常对照组比较有显著差异，其表达量明显减少。计算机Western blot图像半定量分析，结果可见：染铅组大鼠PCNA蛋白的平均灰度值显著低于正常对照组（P0.05）。说明染铅可以降低大鼠血管组织中PCNA蛋白的表达量。免疫组化结果显示，PCNA蛋白免疫组化反应物呈棕黄色，主要表达于SD大鼠血管平滑肌细胞的胞核中，实验组的棕黄色颗粒明显多于相应的正常对照组。 计算机免疫组化图像分析表明，平均光密度（mean density）的比较中，染铅组样本的平均光密度值均低于对照组，其差别有显著性差异（P0.05）。说明染铅可以降低PCNA在大鼠血管组织中表达强度。 3铅对SD大鼠血管中凋亡蛋白Bcl-2表达的影响 Western blot结果显示，1%乙酸铅喂养40天后SD大鼠血管中的Bcl-2蛋白表达量与正常对照组比较有显著差异，其表达量明显减少。计算机Western blot图像半定量分析，结果可见：实验组大鼠Bcl-2蛋白的平均灰度值显著低于正常对照组（P0.05）。说明染铅可以降低大鼠血管组织中Bcl-2蛋白的表达量。 免疫组化结果显示，，Bcl-2凋亡蛋白免疫组化反应物呈棕黄色，主要表达于SD大鼠血管平滑肌细胞的胞浆中，实验组的棕黄色颗粒明显多于相应的正常对照组。 计算机免疫组化图像分析表明，平均光密度值（Mean density）的比较中，实验组样本的平均光密度值均低于对照组，其差别有显著性差异（P0.05）。说明染铅可以降低Bcl-2在大鼠血管组织中表达强度。 4铅对SD大鼠血管中凋亡蛋白Bax表达的影响 Western blot结果显示，1%乙酸铅喂养40天后SD大鼠血管中的Bax蛋白表达量与正常对照组比较有显著差异，其表达量明显增加。 计算机Western blot图像半定量分析，结果可见：实验组大鼠Bax蛋白的平均灰度值显著高于正常对照组（P0.05）。说明染铅可以促进大鼠血管组织中Bax蛋白的表达。 免疫组化结果显示，Bax凋亡蛋白免疫组化反应物呈棕黄色，主要表达于SD大鼠血管平滑肌细胞的胞浆中，实验组的棕黄色颗粒明显多于相应的正常对照组。 计算机免疫组化图像分析表明，平均光密度值（Mean density）的比较中，实验组样本的平均光密度值均高于对照组，其差别有显著性差异（P0.05）。说明铅可以促进Bax在大鼠血管组织中表达强度。 结论： 1短期铅暴露可使大鼠血管管腔扩张，管壁皱褶减少，胞核皱缩，弹性膜皱褶较对照组拉直。 2短期铅暴露可以是PCNA蛋白表达减少，Bcl-2蛋白表达减低，Bax蛋白表达增高，Bcl-2/Bax比值降低，促进血管细胞凋亡。 3实验组大鼠铅暴露后，大鼠血管管腔扩张，弹性减弱，血管细胞异常凋亡可能是其中原因之一。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R114
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3 杨s
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