硫酸铍对小鼠肝组织DNA甲基化及p53、c-Fos、c-Jun蛋白表达的影响

发布时间：2019-07-18 05:43

【摘要】：目的： 通过整体动物腹腔注射硫酸铍（BeSO44H2O），检测硫酸铍对小鼠肝脏总DNA甲基化，p53、c-jun、c-fos基因启动子区CpG岛甲基化状态及其蛋白表达情况的影响，探讨硫酸铍致小鼠肝脏毒性的表观遗传修饰改变。 方法： 1．选取6周龄健康昆明（KM）雄性小鼠36只，按体重随机分成3组：阴性对照组和2个硫酸铍染毒组，每组12只，对照组按0.1ml/10g（体重）腹腔注射灭菌生理盐水，剂量组腹腔注射1mg/kg和2mg/kg硫酸铍灭菌生理盐水溶液。隔天一次，染毒4周。染毒期间小对鼠生长发育等一般情况进行观察。 2．采取颈椎脱臼法处死小鼠，分离完整肝脏，取部分肝组织进行常规病理组织学检查，，其余肝组织-80℃冻存用于DNA提取。 3．采用高效液相色谱法测定小鼠肝脏总DNA甲基化水平；采用甲基化特异性PCR法（MSP）测定小鼠肝脏p53、c-jun、c-fos基因启动子区CpG岛甲基化水平；并采用免疫组化法检测p53、c-Jun、c-Fos蛋白在小鼠肝组织中的表达水平。 结果： 1．小鼠肝脏病理组织学检查结果：对照组肝细胞以中央静脉为中心向四周排列，呈索状，细胞核位于细胞中央；硫酸铍染毒组肝细胞索排列紊乱，细胞发生肿胀，大部分出现颗粒型变性、灶性坏死，出现核固缩，并伴有炎症细胞浸润，肝窦轻度扩张等病理改变。 2．小鼠肝脏总DNA甲基化水平：与对照组比较，硫酸铍染毒组肝脏总DNA甲基化水平随着染毒剂量的增加而升高（P＜0.05）；且高剂量组与低剂量组之间差异有统计学意义（P＜0.01）。 3．对照组中抑癌基因p53，原癌基因c-fos、c-jun启动子区CpG岛均未发生甲基化，而硫酸铍染毒组小鼠肝脏组织中p53、c-fos、c-jun基因启动子区CpG岛都发生了甲基化。 4． p53、c-Jun、c-Fos蛋白免疫组化结果：与对照组相比，p53蛋白随着硫酸铍染毒剂量的增加阳性表达减少，而c-Fos、c-Jun蛋白随着剂量的增加阳性表达增多。灰度扫描结果显示：硫酸铍染毒组小鼠肝脏组织中p53蛋白表达降低、c-Fos和c-Jun蛋白表达升高，与对照组比较差异均有统计学意义（P＜0.01）。 结论： 1.硫酸铍可致小鼠肝脏组织细胞发生变性、坏死等病理改变。 2．硫酸铍可致小鼠肝脏组织总DNA甲基化水平升高及p53、c-fos、c-jun基因启动子区CpG岛甲基化。 3．硫酸铍致小鼠肝脏组织表观遗传改变可能是其肝毒性作用机制之一。
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R114

【共引文献】

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本文编号：2515665