出生前DEHP暴露对大鼠下丘脑—垂体—甲状腺轴的影响

发布时间：2019-07-24 13:20

【摘要】：目的:通过检测出生前DEHP暴露对成年后大鼠甲状腺形态学与甲状腺功能的影响及下丘脑、腺垂体与HPT轴调控相关基因表达水平的影响,探讨出生前DEHP暴露对成年后子代大鼠甲状腺的干扰作用及可能的机制。方法:(1)将32只孕鼠按体重随机分为四个剂量组:0 mg/kg(玉米油溶剂对照组)、2 mg/kg、10 mg/kg和50 mg/kg DEHP处理组,每个剂量组8只。按1mL/100g体重的灌胃体积,自大鼠孕14天至孕19天(G14至G19)进行灌胃染毒。子代大鼠出生后第一天记为PND0。新生大鼠PND21断乳后按性别分笼饲养。(2)将子代大鼠饲养至成年时(PND70),从每窝随机选取雌、雄大鼠各1只(每个剂量组雌、雄各8只),用4%多聚甲醛将雄性大鼠和处于动情间期的雌性大鼠进行心脏灌流固定,取大鼠甲状腺组织,石蜡包埋后用Leica全自动轮转式切片机上制备厚度为6μm的甲状腺组织切片。HE染色后在显微镜下观察甲状腺组织形态学改变。(3)用相同的方法从每窝随机选取雌、雄大鼠各1只(每个剂量组雌、雄各8只),将雄性大鼠和处于动情间期的雌性大鼠断头处死后取血,采用Luminex液相芯片技术对血清中TSH、总T4和总T3的浓度进行测定。(4)取大鼠脑组织,制备成1mm厚的脑切片,根据大鼠脑立体定位图谱,确定下丘脑室旁核(paraventricular nucleus,PVN)和弓状核(Arcuate nucleus,ARC)的位置,用直径为1.25mm的打孔针在两个核区打孔取样。采用Eastep Super RNA提取试剂盒提取下丘脑PVN核区、ARC核区及垂体的总RNA,使用cDNA第一链合成试剂盒进行逆转录,实时荧光定量PCR检测Trh、Trh受体、Tsh、Npy和Npy-Y1受体的基因表达水平。结果:(1)DEHP处理组大鼠甲状腺组织形态学发生改变,与对照组相比,滤泡排列稍紊乱,滤泡上皮细胞数量增加,细胞质出现泡沫样变,滤泡腔直径缩小。(2)雌性大鼠血清TSH浓度在各处理组间无统计学差异。雄性大鼠血清TSH浓度在各处理组间存在统计学差异,与对照组比较,10 mg/kg和50 mg/kg DEHP处理组血清TSH浓度降低(P0.05);雌性和雄性大鼠血清T4浓度在各处理组间无统计学差异;雌性大鼠血清中T3浓度在各处理组间存在统计学差异,与对照组相比,2mg/kg DEHP处理组血清T3浓度降低(P0.05)。雄性大鼠血清T3浓度在各处理组间无统计学差异。(3)雌性和雄性大鼠PVN核区Trh基因表达水平在各处理组间无统计学差异;雌性大鼠垂体Trh受体基因表达水平在各处理组间无统计学差异。雄性大鼠垂体Trh受体基因表达水平在各处理组间存在统计学差异,与对照组相比,2mg/kg和10mg/kg DEHP处理组Trh受体基因表达水平升高(P0.05)。(4)雌性和雄性大鼠垂体Tsh基因表达水平在各处理组间无统计学差异。(5)雌性大鼠ARC核区Npy基因表达水平在各处理组间无统计学差异。雄性大鼠Npy基因表达水平在各处理组间存在统计学差异,与对照组相比,50 mg/kg DEHP处理组Npy基因表达水平降低(P0.05);雌性和雄性大鼠PVN核区Npy-Y1受体基因表达水平在各处理组间无统计学差异。结论:(1)出生前DEHP暴露对成年后子代大鼠甲状腺组织结构及功能具有干扰作用。(2)出生前DEHP暴露对成年大鼠甲状腺的干扰作用机制可能与干扰HPT轴Trh受体及下丘脑ARC核区参与调控TRH合成的Npy基因表达有关。(3)出生前DEHP对甲状腺的干扰作用及作用机制可能具有性别差异。(4)出生前DEHP暴露对成年大鼠的影响具有低剂量效应。
【图文】：

天津医科大学硕士学位论文结果结果2.1 出生前 DEHP 暴露对大鼠甲状腺组织形态学的影响大鼠甲状腺组织 HE 染色后镜下可见，对照组甲状腺滤泡排列有序，上皮细胞结构正常，滤泡无增生或萎缩。与对照组相比，DEHP 处理组甲状腺滤泡排列稍紊乱，甲状腺滤泡上皮细胞数量增加，，细胞质出现泡沫样变，滤泡腔直径缩小。见图 2.1。

出生前DEHP暴露对大鼠下丘脑—垂体—甲状腺轴的影响

表 2.3 出生前 DEHP 暴露对大鼠血清 T3 浓度的影响（ x±s，ng/mL）剂量 n 雌性 n 雄性0 8 1.159±0.289 7 0.804±0.0402 8 0.706±0.165** 8 1.121±0.62910 8 0.929±0.506 8 1.229±0.59850 8 0.851±0.317 8 0.959±0.371注：**与对照组比较 P<0.01。.3 出生前 DEHP 暴露对大鼠 Trh 及其受体基因表达的影响.3.1 出生前 DEHP 暴露对大鼠下丘脑 PVN 核区 Trh 基因表达的影响雌性大鼠下丘脑 PVN 核区 Trh 基因表达水平在各处理组间无统计学差F=1.213, P=0.326）；雄性大鼠下丘脑 PVN 核区 Trh 基因表达水平在各处理无统计学差异（F=0.208, P=0.890）。见图 2.2。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R114

【参考文献】