超高效液相色谱-串联质谱法测定云南野生小豹斑鹅膏菌中的毒蝇碱和毒蝇母
发布时间：2019-08-26 15:31
【摘要】：目的建立超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定野生毒菌中的毒蝇碱和毒蝇母的方法。方法野生毒菌中的毒蝇碱和毒蝇母用甲醇提取,经SPE-C18固相萃取小柱净化和Waters BEH Amide柱(2.1 mm×100mm,1.7μm)分离,在ESI源正离子模式下检测。结果该方法毒蝇碱和毒蝇母的检出限分别为0.5μg/kg和2.0μg/kg,线性范围分别为1~50μg/kg和10~500μg/kg,2个浓度加标回收率分别为90.3%~108.6%和87.8%~107.9%,相对标准偏差为3.2%~5.1%(n=6)。结论该方法准确,快速、灵敏,适合野生毒菌子实体中的毒蝇碱和毒蝇母的测定。
【图文】：
与多反应监测(MRM)方式优化雾化气(GS1)辅助气(GS2)气帘气(CUR)碰撞气(CAD)离子源电压(IS)离子化温度(TEM)等质谱参数，使毒蝇碱、毒蝇母的离子化效率达到最佳，质谱参数见表1。2.3色谱条件的优化毒蝇碱、毒蝇母在C18[7]或C8液相色谱柱上不能很好吸附，出峰太快，且不能充分分离，以至于在UPLC-MS/MSTIC图不能分离。经过摸索本文用WatersBEHAmide2.1mm×100mm,1.7μm色谱柱，能够在UPLC-MS/MSTIC图上很好的分离毒蝇碱、毒蝇母，且出峰稳定、快速。毒蝇碱、毒蝇母标准及毒菌样品中的提取离子（XIC）图，分别见图1、图2。表1梯度洗脱程序时间(min)A%(5mmol/L和0.1%甲酸)水B%乙腈0.130701.090101.590102.030705.03070分析物保留时间（min）离子对(m/z)碰撞气能量CE(eV)去簇电压DP(eV)毒蝇碱1.24174.0/57.1/97.230.8/25.437.89毒蝇母1.46115.3/68.1/98.124.1/15.227.70表2毒蝇碱、毒蝇母MRM监测参数图1毒蝇碱（Muscarine）、毒蝇母（Muscimol）标准提取离子（XIC）图·4067·
?动相，对毒蝇碱、毒蝇母进行洗脱分离效果评价，结果表明使用乙腈/5mmol/L和0.1%甲酸水进行梯度度洗脱，能较为理想。2.5线性范围与检出限毒蝇碱、毒蝇母的线性方程线性范围和线性相关系数见表3。以信噪比为5倍噪声估算检出限(LOD)，样品中毒蝇碱、毒蝇母的检出限分别为0.5μg/kg，2μg/kg。2.6方法的回收率与精密度取1份样品，分别进行低、高浓度2种不同浓度加标试验，毒蝇碱在90.3%～108.6%，毒蝇母在87.8%～107.9%，6次平行测定相对标准差平均值（RSD）毒蝇碱在3.2%～5.1%,毒蝇母3.6%～4.5%，结果见表4。图2小豹斑鹅膏菌中毒蝇碱（Muscarine，1.23）、毒蝇母（Muscimol，1.44）提取离子（XIC）图分析物线性方程线性范围（μg/kg）相关系数（r值）检出限（μg/kg）毒蝇碱y=795x-1831～500.99910.5毒蝇母y=47.2x-34010～5000.99942.0表3毒蝇碱、毒蝇母的线性方程、相关系数和检出限分析物加标量（μg/kg）平均回收率（%）CV（%）加标量（μg/kg）平均回收率（%）CV（%）样品+毒蝇碱490.35.120108.63.2样品+毒蝇母4087.84.5200107.93.62.7定性测定样品溶液按照液相色谱/质谱测定条件分别进行测定，进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品相一致，，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的2个二级特征离子均出现，且与标准样品的2个特征离子相一致，则可判断样品中存在毒蝇碱、毒蝇母。2.8定量测定本方法采用外标校准曲线法进行定量测定，为减少流动相对定量测定的影响，采用初始流动相来配制标准系列溶液，绘制标准曲线，并且保证所测样品中毒蝇碱、毒蝇母的响应值均在仪器的线性范围内。检测云南野生小豹斑鹅膏菌中的毒蝇碱和毒蝇母，含量分别为毒蝇碱116.7mg/kg，毒蝇母586.8mg/k
【作者单位】： 云南省疾病预防控制中心;
【基金】：云南省卫生科技项目(编号:2014NS352)
【分类号】：R155.5
本文编号：2529400
【图文】：
与多反应监测(MRM)方式优化雾化气(GS1)辅助气(GS2)气帘气(CUR)碰撞气(CAD)离子源电压(IS)离子化温度(TEM)等质谱参数，使毒蝇碱、毒蝇母的离子化效率达到最佳，质谱参数见表1。2.3色谱条件的优化毒蝇碱、毒蝇母在C18[7]或C8液相色谱柱上不能很好吸附，出峰太快，且不能充分分离，以至于在UPLC-MS/MSTIC图不能分离。经过摸索本文用WatersBEHAmide2.1mm×100mm,1.7μm色谱柱，能够在UPLC-MS/MSTIC图上很好的分离毒蝇碱、毒蝇母，且出峰稳定、快速。毒蝇碱、毒蝇母标准及毒菌样品中的提取离子（XIC）图，分别见图1、图2。表1梯度洗脱程序时间(min)A%(5mmol/L和0.1%甲酸)水B%乙腈0.130701.090101.590102.030705.03070分析物保留时间（min）离子对(m/z)碰撞气能量CE(eV)去簇电压DP(eV)毒蝇碱1.24174.0/57.1/97.230.8/25.437.89毒蝇母1.46115.3/68.1/98.124.1/15.227.70表2毒蝇碱、毒蝇母MRM监测参数图1毒蝇碱（Muscarine）、毒蝇母（Muscimol）标准提取离子（XIC）图·4067·
?动相，对毒蝇碱、毒蝇母进行洗脱分离效果评价，结果表明使用乙腈/5mmol/L和0.1%甲酸水进行梯度度洗脱，能较为理想。2.5线性范围与检出限毒蝇碱、毒蝇母的线性方程线性范围和线性相关系数见表3。以信噪比为5倍噪声估算检出限(LOD)，样品中毒蝇碱、毒蝇母的检出限分别为0.5μg/kg，2μg/kg。2.6方法的回收率与精密度取1份样品，分别进行低、高浓度2种不同浓度加标试验，毒蝇碱在90.3%～108.6%，毒蝇母在87.8%～107.9%，6次平行测定相对标准差平均值（RSD）毒蝇碱在3.2%～5.1%,毒蝇母3.6%～4.5%，结果见表4。图2小豹斑鹅膏菌中毒蝇碱（Muscarine，1.23）、毒蝇母（Muscimol，1.44）提取离子（XIC）图分析物线性方程线性范围（μg/kg）相关系数（r值）检出限（μg/kg）毒蝇碱y=795x-1831～500.99910.5毒蝇母y=47.2x-34010～5000.99942.0表3毒蝇碱、毒蝇母的线性方程、相关系数和检出限分析物加标量（μg/kg）平均回收率（%）CV（%）加标量（μg/kg）平均回收率（%）CV（%）样品+毒蝇碱490.35.120108.63.2样品+毒蝇母4087.84.5200107.93.62.7定性测定样品溶液按照液相色谱/质谱测定条件分别进行测定，进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品相一致，，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的2个二级特征离子均出现，且与标准样品的2个特征离子相一致，则可判断样品中存在毒蝇碱、毒蝇母。2.8定量测定本方法采用外标校准曲线法进行定量测定，为减少流动相对定量测定的影响，采用初始流动相来配制标准系列溶液，绘制标准曲线，并且保证所测样品中毒蝇碱、毒蝇母的响应值均在仪器的线性范围内。检测云南野生小豹斑鹅膏菌中的毒蝇碱和毒蝇母，含量分别为毒蝇碱116.7mg/kg，毒蝇母586.8mg/k
【作者单位】： 云南省疾病预防控制中心;
【基金】：云南省卫生科技项目(编号:2014NS352)
【分类号】：R155.5
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