消减麸质蛋白毒性作用的天然抗氧化合物筛选及其分子作用机制研究

发布时间：2020-04-29 04:51

【摘要】：乳糜泻在工业化国家和白种人中的发病率已上升至1%-8%。在我国,乳糜泻的冰山也正在浮起。在以小麦为主食的山东人群中,乳糜泻的发病率达到了0.76%。目前,终生严格坚持无麸质饮食是治疗乳糜泻的最佳方法。然而,因我国无麸质食品生产链缺失,人们对无麸质饮食意识度不高而且小麦粉和麸质蛋白作为配料已广泛用于加工食品中,导致乳糜泻患者在日常生活中难以完全避免摄入麸质。另外,长期无麸质饮食将会影响患者的社会交往活动,对其心理与经济造成负担。由此可见,探寻新的冶疗方法用于辅助或替代无麸质饮食疗法具有重要意义。抗氧化物具有清除活性自由基,缓解氧化应激以及抑制某些促炎因子表达的作用,那么抗氧化物是否可以在一定程度上缓解乳糜泻的氧化应激及某些病症,成为治疗乳糜泻的辅助手段,这值得进一步研究。本研究通过采用Caco-2细胞构建乳糜泻氧化应激模型,应用现代分子生物学技术筛选可以消减麸质蛋白毒性作用的天然抗氧化物并对其分子作用机制进行了研究。主要方法、结果和结论如下:(1)乳糜泻氧化应激模型的构建Caco-2细胞经过不同浓度,不同作用时间的麸质蛋白衍生肽段p31-43处理,以细胞内ROS水平、SOD酶活性、MDA和GSH含量为检测指标,成功构建了基于Caco-2细胞的乳糜泻氧化应激模型。(2)消减麸质蛋白毒性作用的天然抗氧化物筛选选取不同作用时间,不同浓度以及不同种类的天然抗氧化物预处理已成功建立的细胞模型,从麸质蛋白衍生肽段p31-43所诱导的细胞氧化损伤、乳糜泻标志物及炎症因子表达、小肠上皮屏障功能紊乱三方面筛选可以消减麸质蛋白毒性作用的天然抗氧化物。结果从槲皮素、表没食子儿茶素没食子酸酯、染料木素、β-胡萝卜素、杨梅酮、山柰酚、白藜芦醇7种天然抗氧化物中成功筛选到了槲皮素、表没食子儿茶素没食子酸酯和白藜芦醇3种。(3)抗氧化物消减麸质蛋白毒性作用分子机制的研究通过Q-PCR技术研究抗氧化物对Nrf2、mTOR、SIRT三条信号通路中关键基因表达的影响,以此对其分子作用机制进行初步研究。结果显示筛选所得到的3种天然抗氧化物分子作用机制各不相同,其中白藜芦醇的处理可以促进sirt1和sirt3基因的表达,说明白藜芦醇消减麸质蛋白毒性作用的机制与SIRT信号通路的激活相关。
【图文】：

氧化应激,基因表达,蛋白

2图 1.1 麸质蛋白对氧化应激和基因表达的影响自于 Celiac Disease, Inflammation and Oxidative Damage‖

氧杂,母核,黄酮类,多酚

和还原剂等[39]。下文主要对涉及到的是一类主要存在于植物体内的天然抗氧要分为聚合体和非聚合体两大类。非聚合物。如表没食子儿茶素没食子酸酯，槲芦醇等。大豆，洋葱，绿茶，蓝莓提取合而成，且统称为单宁类物质。原花青葡萄籽，，苹果提取物均属于此类[40]。氧化物都具有图 1.2 所示的 2-苯基氧杂据母核结构上取代基团的差异又分成黄黄烷酮醇类、花青素类等。由于氢质子能力的大小与分子中质子氢的提供能力-OH‖基团数越多，则清除自由基的能力
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R151

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