PCB153暴露293T细胞导致LINE-1表达及转座的研究

发布时间：2020-10-12 06:18

　　 目的:多氯联苯(polychlorinated biphenyls,PCBs)是一类具有持久性、生物蓄积性、高毒性的有机污染物。2,2',4,4',5,5'-六氯联苯(2,2',4,4',5,5'-hexachlorobiphenyl,PCB153)是人体组织中含量最多的PCBs同系物之一,与人类健康关系密切。PCB153可导致DNA损伤,基因组不稳定等。长散在重复序列-1(long interspersed element-1,LINE-1)是人类基因组中唯一可以自主转座的逆转座子,LINE-1发生转座可降低基因组稳定性。本研究分析了PCB153暴露下,人肾上皮细胞系(293T细胞)中LINE-1的表达及转座、细胞凋亡和DNA损伤情况,为PCBs的分子毒理学研究提供新思路。方法:(1)流式细胞法检测293T细胞的凋亡情况。(2)荧光定量技术(Real-time PCR)检测LINE-1 m RNA基因的表达水平。蛋白质免疫印记技术(Western blot)检测LINE-1蛋白表达水平。(3)Real-time PCR检测LINE-1在基因组上的拷贝数。(4)焦磷酸测序技术检测LINE-1启动子区域甲基化状态。Real-time PCR技术检测甲基化相关基因m RNA的表达水平。(5)免疫荧光技术检测293T细胞的DNA损伤情况。Real-time PCR技术检测DNA损伤修复相关基因m RNA的表达水平。结果:(1)与对照组相比,15μmol/L PCB153可致293T细胞凋亡率增加。(2)与对照组相比,不同浓度PCB153(5μmol/L,10μmol/L,15μmol/L)作用293T细胞48h后,细胞中LINE-1 m RNA的表达升高。在染毒96h时,LINE-1蛋白表达升高,且差异最为明显。(3)与对照组相比,不同浓度PCB153(5μmol/L,10μmol/L,15μmol/L)作用293T细胞96h后,细胞中LINE-1拷贝数均增加。15μmol/L PCB153染毒组差异最为明显。(4)在染毒96h时,与对照组相比,15μmol/L PCB153可导致293T细胞中LINE-1甲基化水平下降。同时,293T细胞中甲基化酶DNMT3B基因m RNA表达量下降,去甲基化酶TET1基因m RNA表达量升高。(5)在染毒96h时,与对照组相比,15μmol/L PCB153可致细胞发生DNA损伤。与对照组相比,15μmol/L PCB153可导致293T细胞中RAD51D和XRCC2 m RNA表达量下降,XRCC5和XRCC6 m RNA表达量升高。结论:(1)PCB153暴露可诱导293T细胞凋亡。(2)PCB153暴露能降低LINE-1甲基化,增加LINE-1表达量,可能诱导LINE-1转座。(3)PCB153暴露可导致DNA损伤,并且对DNA损伤修复有影响。
【学位单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R114
【部分图文】：

笱?妒垦?宦畚?一、PCB153 对 293T 细胞凋亡的影响9图3 流式细胞法检测染毒96h时293T细胞的凋亡率（A：对照组；B：15μmol/L PCB153 染毒组）图4 染毒96h时，PCB153对293T细胞凋亡的影响（*P＜0.05）1.4 讨论PCBs 是由德国科学家最早合成的，由美国最先开始生产的。PCBs 因具有良好的化学稳定性、热稳定性、导热性、阻燃性、高粘性、绝缘性，被广泛应用于生产领域。目前，某些富含 PCBs 的电子垃圾目前仍存在流失和非法利用的现象。大气污染中的 PCBs 是脂溶性的，会随着呼吸、饮食等方式进入机体内。PCBs中所有的羟基代谢物都是通过胆汁经胃肠道从粪便排出，只有一小部?

图3 流式细胞法检测染毒96h时293T细胞的凋亡率（A：对照组；B：15μmol/L PCB153 染毒组）图4 染毒96h时，PCB153对293T细胞凋亡的影响（*P＜0.05）1.4 讨论PCBs 是由德国科学家最早合成的，由美国最先开始生产的。PCBs 因具有良好的化学稳定性、热稳定性、导热性、阻燃性、高粘性、绝缘性，被广泛应用于生产领域。目前，某些富含 PCBs 的电子垃圾目前仍存在流失和非法利用的现象。大气污染中的 PCBs 是脂溶性的，会随着呼吸、饮食等方式进入机体内。PCBs中所有的羟基代谢物都是通过胆汁经胃肠道从粪便排出，只有一小部分 PCBs 在A B

士学位论文 二、PCB153 对 293T 细胞中 LINE-1 表达及拷贝48h时，对照组与10μmol/L PCB153染毒组的LINE-1 ORF-1为0.99±0.04和1.51±0.10，差异具有统计学意义（P<0.05/L PCB153 染 毒 组的 LINE-1 ORF-1 mRNA相 对 表达 量.60±0.12，差异具有统计学意义（P<0.05）。在PCB153染mol/L PCB153染毒组的LINE-1 ORF-1 mRNA相对表达.46±0.13，差异具有统计学意义（P<0.05）；对照组与组的LINE-1 ORF-1 mRNA相对表达量分别为1.31±0.19和2学意义（P<0.05）；对照组与15μmol/L PCB153染毒组A相对表达量分别为1.31±0.19和2.60±0.11，差异具有统
【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 沈丹;谢雨琇;李庆平;薛松磊;史云强;王赛赛;陈才;钱跃;高波;崔恒宓;宋成义;;多转座子载体的构建及转座特性比较研究[J];中国农业科学;2015年11期

2 郝景芳;;你永远不知道一样东西真正的用处[J];文苑(经典美文);2016年12期

3 倪欣涛;卢凤英;苗双;朱寅玉;邢林林;俞慧;祁晶晶;王桂军;胡青海;;鸭疫里氏杆菌转座子随机突变库的构建[J];中国兽医科学;2014年04期

4 李永文;姚毅冰;万海粟;周清华;;“睡美人”转座子及其在肿瘤研究中的应用[J];中国肺癌杂志;2008年06期

5 刘冬;;转座子在转基因动物中的应用[J];中国牧业通讯;2008年07期

6 黄春;张万江;;转座子及其相关技术的研究[J];世界华人消化杂志;2006年17期

7 王志耘;李文成;陶美凤;;一个链霉菌中微型转座子系统的构建[J];湖北农业科学;2006年06期

8 黄坤艳,饶力群,储成才;转座子标签法及其在水稻功能基因组研究中的应用[J];高技术通讯;2003年06期

9 廖鸣娟,董爱华,王正栋,朱睦元;植物转座子及其在功能基因组学中的应用[J];遗传;2000年05期

10 李凤玲,赵毓橘;植物转座子[J];植物生理学通讯;2000年05期

相关博士学位论文 前10条

1 殷豪;梨基因组LTR反转座子注释及进化分析研究[D];南京农业大学;2014年

2 武红玉;二穗短柄草Ac/Ds转座体系的构建及其应用[D];山东农业大学;2018年

3 张化浩;家蚕基因组中转座子的水平转移[D];重庆大学;2014年

4 张森;利用转座子系统定向突变拟南芥基因以及拟南芥FA121和FA254两基因功能的研究[D];中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）;2004年

5 龙丽坤;高压诱导水稻发生可遗传DNA甲基化变异和转座子mPing及Pong的转座激活[D];东北师范大学;2006年

6 李竹红;用转座子与RNA/DNA嵌合寡核苷酸探讨靶向性基因治疗[D];中国协和医科大学;2000年

7 丁昇;piggyBac转座系统[D];复旦大学;2007年

8 单晓辉;菰DNA渐渗诱发水稻内源转座子mPing、Pong的转座激活[D];东北师范大学;2007年

9 沈野;菰DNA渐渗诱导水稻内源LTR类反转座子的遗传和表观遗传变异[D];东北师范大学;2008年

10 叶晨波;电击介导和Sleeping Beauty转座子介导的人凝血因子Ⅸ基因表达研究[D];复旦大学;2003年

相关硕士学位论文 前10条

1 杨勤帅;转座子Tgm9的演化和应用[D];西北大学;2018年

2 常恩洁;大豆转座子Tgm9转座机制的研究[D];西北大学;2018年

3 王传文;基于大规模群体测序的水稻转座子变异研究[D];华中农业大学;2018年

4 李旭;石刁柏基因组转座子的组成与定位[D];河南师范大学;2018年

5 占喆;携带bla_(IMP)的四个新型转座子与质粒和染色体整合研究[D];安徽医科大学;2018年

6 范伟;基于转座子载体高压注射的免疫缺陷小鼠体内多种人淋巴因子长期表达策略的研究[D];吉林大学;2018年

7 李佳慈;PCB153暴露293T细胞导致LINE-1表达及转座的研究[D];天津医科大学;2018年

8 魏银;Shinella sp.HZN7代谢尼古丁的分子机制初步研究[D];浙江工业大学;2014年

9 张阳;金黄色葡萄球菌转座子突变文库的构建与肠毒素A相关基因的研究[D];西北农林科技大学;2017年

10 钟继汉;鱼类自主pogo转座子的挖掘、进化及活性验证[D];扬州大学;2017年

本文编号：2837772