ω-3多不饱和脂肪酸对高脂饮食诱导小鼠卵巢功能的影响

发布时间：2020-10-22 15:22

　　 多不饱和脂肪酸作为机体不可或缺的必需脂肪酸,参与许多生理活动的调控,其广泛的生物学功能成为研究热点。大量证据表明,多不饱和脂肪酸不仅能够调节脂类代谢、提高机体免疫功能、预防心血管疾病,同时还能够促进机体生长发育。随着人们生活水平的不断提高,饮食习惯越来越趋向于西方化的高脂膳食,大量临床研究表明,过量摄入膳食脂肪在引发肥胖以及脂代谢紊乱的同时,对女性生殖健康造成影响。另外,本课题组前期的研究发现补充多不饱和脂肪酸的高脂饮食对雄性小鼠精子生成与精子活力有显著促进作用,然而,对于补充ω-3多不饱和脂肪酸的高脂饮食对雌性小鼠卵巢功能有何影响仍不明确。因此,我们以C57BL/6J雌鼠为动物模型进行了以下研究:目的:研究补充ω-3多不饱和脂肪酸的高脂饮食对小鼠卵巢功能的影响。方法:8周龄雌性C57BL/6J小鼠随机分为对照组(CON)、高脂组(HFD)和ω-3 PUFA组(HFFO),每组12只,对照组喂食基础饲料,高脂组喂食60%高脂饲料,ω-3 PUFA组喂食5%鱼油加60%高脂饲料。(1)每周记录小鼠体重;(2)通过阴道脱落细胞检查来监测小鼠动情周期;(3)造模结束前一周检测小鼠葡萄糖耐受情况;(4)小鼠生殖实验:将饮食干预28周的雌鼠与性成熟的雄性C57BL/6J小鼠以1:1的比例进行交配,观察小鼠生育情况。(5)利用ELISA试剂盒检测血清中卵泡刺激素、黄体生成素、雌激素和睾酮等激素水平变化;(6)采用Real-time PCR和Western blot以及免疫组化方法检测相关激素受体基因及蛋白的表达变化;(7)利用病理组织染色观察小鼠卵巢组织的形态学变化、卵泡发育情况,并进行卵泡计数;(8)利用TUNEL染色检测卵巢组织卵泡凋亡。(9)利用16S-rDNA高通量测序技术分析肠道微生物组成及其变化。结果:(1)体重结果:饮食干预5周后,HFD组小鼠体重显著高于基础饮食组,饮食干预8周后,HFFO组小鼠体重显著高于基础饮食组;饮食干预18周后,HFFO组小鼠体重显著低于HFD组。(2)糖耐量比较:HFD和HFFO组小鼠的空腹血糖显著高于CON组,而HFFO组的空腹血糖水平明显低于HFD组;与CON组相比,HFD和HFFO组均出现了葡萄糖不耐受情况,且AUC显著升高,空腹血清胰岛素水平也显著升高。(3)动情周期情况:与CON组相比,HFD组小鼠动情前期减少,补充FO增加了高脂饮食诱导的动情前期数,且相同时间内周期循环数显著高于HFD组。(4)生殖情况:HFD组小鼠怀孕率和产仔数显著低于CON组和HFFO组。(5)生殖激素水平比较:高脂饮食干预下,小鼠血清中E_2水平显著降低,FSH、LH、睾酮水平显著升高;与HFD组相比,HFFO组FSH、LH水平显著降低。(6)基因表达:高脂饮食干预下,小鼠卵巢组织中FSHR和LHR蛋白表达显著降低,补充FO组与CON组无显著差异;与HFD组相比,HFFO组Lhr mRNA水平显著升高。(7)组织形态变化:CON组卵巢组织形态正常,细胞核清晰可见,周围颗粒细胞排列整齐致密;高脂饮食干预下,小鼠卵巢中颗粒细胞排列松散、紊乱,细胞层数减少,间质增生,闭锁卵泡显著增多;相较于HFD组,HFFO组闭锁卵泡减少。(8)TUNEL结果:高脂饮食干预下,小鼠卵巢组织卵泡凋亡增加,补充FO缓解了卵泡凋亡。(9)高脂饮食及补充FO改变了小鼠肠道微生物组成,并且补充FO显著降低了疣微菌门的相对丰富度。结论:高脂饮食导致小鼠肥胖,FSH、LH和睾酮水平升高以及雌激素水平降低,伴随动情周期的紊乱,影响了小鼠卵巢的功能,致使小鼠不孕;补充ω-3 PUFAs对高脂饮食诱导的肥胖有改善作用,影响性激素水平,改善动情周期紊乱程度,增加高脂饮食干预下小鼠的怀孕率,改善了高脂饮食对卵巢功能的影响。补充ω-3 PUFAs改变了高脂饮食干预下小鼠的肠道微生物组成。
【学位单位】：华南理工大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R151
【部分图文】：

图 2.2-1 小鼠阴道脱落细胞涂片验7 周后，于实验前一天晚上 20:00 至次日早上 8:00，移验开始前先称量每组小鼠体重并记录，并从尾巴取血 体重剂量灌胃 20%葡萄糖注射液，分别于 15、30、6值并记录。实验8 周后，观察小鼠所处动情周期，当小鼠处于动情前期常的雄鼠，按 1：1 进行合笼，并于次日早上 8:00 检测道栓时，将雄鼠移出，若无阴道栓则继续合笼，并记录鼠怀孕则为可孕母鼠，不再继续合笼；若连续 20 天合三次，计算交配率及怀孕率。

图 3-1 不同饮食干预对小鼠体重的影响a.各组小鼠体重增长曲线，横坐标为干预时间周数，纵坐标为小鼠体质量数，相比*p﹤0.05，** p﹤0.01，*** p﹤0.001，**** p﹤0.0001；HFD 组与 HFFO#p﹤0.05，## p﹤0.01。b.造模结束各组小鼠体重增加量，纵坐标为体重增加量间相比较** p﹤0.01，*** p﹤0.001，**** p﹤0.0001。所有数值用 X±S.E.M 表3.2.2 ω-3 PUFAs 对高脂饮食诱导小鼠糖耐量的影响为了评估饮食干预后，小鼠对葡萄糖的调节能力，我们对不同饮食条件下耐量情况进行了检测，发现 HFD 组与 HFFO 组小鼠的空腹血糖均显著高于 CHFFO 组小鼠的空腹血糖显著低于 HFD 组（图 3-2a），说明 ω-3 PUFAs 能在一加空腹状态下机体对葡糖糖的调节能力；有趣的是，我们发现在给予葡萄糖 HFFO 组小鼠的血糖水平显著高于 HFD 组，但在 60min 时恢复到与 HFD 组相负荷 30min 以后 FO 才对葡萄糖的调节作用显著，然而在 120min 后这两组小

糖的调控能力越弱[126]，结果显示，HFD和HFFO组AUC值均显著高于CON组（图3-2c），说明高脂饮食导致小鼠对葡萄糖负荷下血糖的调节能力较弱，而且补充 FO 没有明显改善糖耐量异常，可能是 ω-3 PUFAs 的代谢产物使得糖脂代谢的过程受到了抑制而引起机体糖代谢异常，具体机制尚不清楚，有待进一步的研究。另外，我们检测了小鼠空腹血清胰岛素水平，结果发现，HFD 组和 HFFO 组小鼠血清中胰岛素水平显著高于 CON 组，对胰岛素敏感性降低，HFFO 组小鼠血清中胰岛素水平相比 HFD 组稍有改善
【参考文献】

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本文编号：2851769