母乳又被誉为“白色血液”,由身体健康且营养状态好的母亲分泌的乳汁,富含各类营养素,是保障足月出生婴儿健康生长及发育的最理想食物来源。脂肪和脂肪酸被认为是提供婴儿能量和营养的重要化合物,乳汁中的脂肪酸是促进婴儿中枢神经系统发育的主要物质来源,尤其是多不饱和脂肪酸,在婴儿生长发育中发挥的作用已获得广泛认可。母乳中脂肪酸成分的多寡可能受到乳母膳食与基因的共同影响,对于日常膳食摄入较少鱼类的内陆地区乳母,FADS基因编码的Δ-5和Δ-6去饱和酶在体内PUFA转化中所发挥作用可能更为突出,但FADS基因变异对脂肪酸状态的影响以及FADS基因簇中的很多功能性SNP均未被鉴定,且未有研究报道母乳中的FADS基因表达情况与脂肪酸间的关联。关于膳食对母乳脂肪酸影响的研究目前主要集中于单一的膳食和补充剂摄入,但由于日常生活中人们不只摄取一种营养素或食物,而是从各种类型的食物中摄取大量营养素,并且已经形成了固定习惯的饮食模式,但关于膳食模式与乳汁FA构成谱的研究很少。本研究收集了长春地区的哺乳期女性的乳汁样本,探讨了FADS基因簇的SNP与母乳PUFA水平的关系;运用膳食模式来探索膳食摄入与母乳FA之间的关系;建立了检测母乳FADS基因表达的体系,分析了母乳的PUFA水平在不同FADS基因表达组的差异性。本研究包括了以下三个部分内容:第一部分:FADS基因簇与乳汁脂肪酸目的:明确FADS基因簇的rs174547、rs174553、rs174602、rs3834458和rs1000778位点与母乳PUFA水平的关系。方法:收集2012年3月至2014年12月在长春市某产后护理中心的420名产后22-25天的哺乳期女性,均签署了知情同意书,且提供完善的问卷和足够的母乳。运用气相色谱检测母乳中的8种PUFA水平,提取母乳中的DNA并运用Sequenom MassArray系统进行FADS基因簇上的5个SNP分型。使用SPSS24.0软件分析研究对象的基本信息及母乳中的8种PUFA水平;使用SNPstats在线分析软件分析FADS基因的5个SNP与乳汁PUFA水平间的关系。结果:1.母乳中的LA、ALA、DGLA、EPA、DTA和DHA水平与年龄呈正相关(P0.05),LA、ALA、DGLA和DTA与乳母产后BMI相关(P0.05),未发现母乳PUFA水平与膳食来源PUFA的相关性(P0.05)。2.研究纳入的5个位点的检出率最低的为rs174547(96.19%),其他位点的检出率均位于97%以上;Hardy-Weinberg检验的P值最小的为0.30,均符合Hardy-Weinberg遗传平衡。3.母乳的LA、ALA和DHA水平和在各位点的不同遗传模式组中无差异性(P0.05)。4.母乳GLA和AA水平与FADS1基因的rs174547位点、rs174553位点和FADS2基因的rs3834458位点、rs174602位点有关;rs174547、rs174553和rs3834458位点的最优模式为共显性模式,rs174602位点最优遗传模式为显性模式。5.母乳DGLA水平与FADS1基因的rs174547位点和FADS2基因的rs3834458位点有关;前者的最优遗传模式为显性模式,后者的最优遗传模式为隐性模式。6.母乳EPA水平与FADS1基因的rs174547位点、FADS2基因的rs3834458位点、rs174602位点有关,最优遗传模式为显性模式;与FADS3基因的rs1000778位点也有关,最优遗传模式为隐性模式。7.母乳DTA水平与FADS1基因的rs174547位点、rs174553位点、FADS2基因的rs3834458位点有关,这3个SNP位点的最优模式均为隐性模式。结论:1.母乳PUFA水平与乳母的年龄和产后BMI相关,与膳食中的PUFA无关。2.母乳中的GLA、DGLA、AA和DTA水平与FADS1和FADS2基因变异有关,母乳中的EPA水平与FADS1、FADS2和FADS3基因的变异有关。第二部分:膳食模式与乳汁脂肪酸目的:研究膳食模式与哺乳期母亲的母乳FA构成谱之间的关系,为哺乳期女性的合理膳食和更好的哺育婴儿提供科学依据。方法:采用横断面调查,从2015年1月开始至2017年6月,招募了长春市274名产后22天到6个月健康的汉族哺乳期女性,收集问卷和乳汁。检测母乳中的FA构成谱,使用主成分分析法将研究对象的膳食情况划分为不同的膳食模式。运用SPSS24.0统计学软件分析不同膳食模式组乳母的膳食和乳汁FA的构成差异。结果:1.本研究纳入的哺乳期女性日常能量摄入的平均水平为1774.36 kcal,占推荐摄入量的77.15%;碳水化合物的平均摄入量为233.76 g/d,蛋白质的平均摄入量为67.38 g/d,脂肪的平均摄入量为66.65 g/d,分别占推荐摄入量的70.70%、84.22%和104.31%。2.本研究共划分为4种膳食模式:模式1是以菌藻类、肉类和水产品为主,模式2是以大豆及其制品、坚果和乳制品为主,模式3以水果和蔬菜为主,模式4是以谷薯类、豆制品和蛋类为主。3.在不同的膳食模式中,乳母日常的能量、碳水化合物、蛋白质的平均摄入量以及它们分别与其参考摄入量的比值在四组膳食模式之间的差异均具有统计学意义(P=0.014,P=0.004,P=0.002);而乳母的每日脂肪摄入量和比值在四组膳食模式之间的差异无统计学意义(P=0.556)。4.乳母日常摄入的钙、铁、锌、铜和镁在四组膳食模式之间均具有统计学差异(P0.001,P0.001,P=0.021,P0.001,P=0.012);维生素A、维生素B_1、维生素B_2、烟酸和叶酸的摄入量在四组膳食模式之间的差异均具有统计学意义(P=0.011,P=0.045,P=0.004,P=0.003,P=0.029),而维生素C和维生素E未显示差异。5.母乳中的SFA和PUFA的总比例在不同模式间有统计学差异(P0.001,P=0.025),n-6 PUFA的比例也显示有统计学意义(P=0.038);而乳汁中的MUFA,n-3 PUFA和n-6/n-3在4种膳食模式间的差异未发现有统计学意义(P0.05)。6.母乳的SFA中,C6:0、C10:0、C11:0和C23:0的比例在不同模式间有统计学差异(P=0.038,P=0.008,P=0.003,P0.001);MUFA中,C15:1(P=0.048)、C18:1n9t(P0.001)和C18:1n9c(P=0.002)表现出差异性;母乳PUFA中,C18:2n6c、C20:2、C20:3n6、C20:4n6和C22:6n3这5种PUFA在不同的膳食模式间显示有差异性(P=0.002,P=0.043,P0.001,P=0.018,P=0.020)。结论:1.274名乳母的日常能量摄入量以及碳水化合物和蛋白质摄入量的平均水平均低于参考摄入量,而脂肪的平均摄入量高于参考摄入量。2.不同膳食模式间乳母的能量摄入、碳水化合物、蛋白质、矿物质和微量元素摄入量均有所不同。3.膳食模式可影响母乳中的SFA、PUFA和n-6PUFA的含量。第三部分:FADS基因表达与乳汁脂肪酸目的:探索母乳的PUFA水平在不同FADS基因表达组的差异性,为更准确地研究母乳PUFA水平与FADS基因相关性提供科学依据。方法:研究对象为从2017年1月开始至2017年8月,在长春市某妇幼保健医院招募的50名产后42-45天的健康汉族女性,调查基本信息问卷并收集母乳。检测乳汁中的8种PUFA,采用Trizol法提取乳汁中的RNA,使用实时定量PCR实验检测母乳中的FADS基因mRNA表达水平;提取乳汁中蛋白并结合Western blot实验技术检测母乳中FADS基因的蛋白表达水平。运用SPSS24.0统计学软件分析母乳的PUFA水平在不同FADS基因mRNA表达水平和蛋白表达水平组的差异。结果:1.本研究乳母的乳汁中AA占总FA的0.8616%,DHA含量为0.2952%。2.母乳中的GLA含量在FADS1基因mRNA表达水平分组中具有统计学意义(P=0.009),且FADS1基因mRNA表达水平较高组的母乳GLA含量为0.3606%,高于FADS1基因mRNA表达水平较低组的0.2869%。3.母乳中的二十碳三烯酸(C20:3n6)含量在FADS1基因mRNA表达水平分组中具有统计学意义(P=0.042),且FADS1基因mRNA表达水平较高组的母乳二十碳三烯酸(C20:3n6)含量(0.5088%)高于FADS1基因mRNA表达水平较低组(0.4363%)。4.母乳中的二十碳三烯酸(C20:3n3)含量在FADS1基因蛋白表达水平分组中具有统计学意义(P=0.047),且FADS1基因蛋白表达水平较高组的母乳二十碳三烯酸含量(0.1132%)高于FADS1基因蛋白表达水平较低组(0.0888%)。5.母乳中EPA含量在FADS3基因蛋白表达水平分组中具有统计学意义(P=0.040),且FADS3基因蛋白表达水平较高组的母乳EPA含量(0.1366%)高于FADS3基因蛋白表达水平较低组(0.1012%)。6.母乳中DHA含量在FADS1基因蛋白表达水平分组中具有统计学意义(P=0.020),且FADS1基因蛋白表达水平较高组的母乳DHA含量(0.3228%)高于FADS1基因蛋白表达水平较低组(0.2526%)。结论:1.母乳n-6 PUFA中的GLA和二十碳三烯酸(C20:3n6)与FADS1基因的mRNA表达水平有关。2.母乳中n-3 PUFA中的二十碳三烯酸(C20:3n3)和DHA与FADS1基因的蛋白表达水平有关,EPA与FADS3基因的蛋白表达水平有关。
【学位单位】：吉林大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R174.4
【文章目录】：中文摘要
abstract
第1章 前言
1.1 母乳喂养概述
1.1.1 母乳喂养的现况
1.1.2 母乳喂养的优点
1.2 母乳的成分概述
1.2.1 宏量营养素
1.2.2 微量营养素
1.2.3 生物活性物质
1.3 脂肪酸的作用
1.3.1 饱和脂肪酸
1.3.2 单不饱和脂肪酸
1.3.3 多不饱和脂肪酸
1.4 影响PUFAs水平的因素
1.4.1 膳食摄入
1.4.2 FADS基因多态性
1.5 研究依据、内容和创新点
1.5.1 研究依据
1.5.2 研究内容
1.5.3 创新点
第2章 FADS基因簇与乳汁脂肪酸
2.1 引言
2.2 材料与方法
2.2.1 研究对象
2.2.2 实验试剂和仪器
2.2.3 实验方法
2.2.3.1 乳汁收集
2.2.3.2 基本信息调查
2.2.3.3 3d24h膳食调查
2.2.3.4 膳食频率调查
2.2.3.5 乳汁PUFA的检测
2.2.3.6 FADS基因簇的SNP分型
2.2.4 数据库建立
2.2.5 数据分析
2.2.6 技术路线
2.3 实验结果
2.3.1 研究对象的基本情况
2.3.2 研究对象的膳食营养素摄入量
2.3.3 母乳PUFA与膳食PUFA
2.3.4 母乳PUFA与 FADS基因簇的SNP
2.4 讨论
2.5 小结
第3章 膳食模式与乳汁脂肪酸
3.1 引言
3.2 材料与方法
3.2.1 研究对象
3.2.2 实验试剂和仪器
3.2.3 实验方法
3.2.4 数据库建立
3.2.5 数据分析
3.3 实验结果
3.3.1 基本情况
3.3.2 膳食模式
3.3.3 乳汁脂肪酸
3.3.4 膳食模式与乳汁脂肪酸
3.4 讨论
3.5 小结
第4章 FADS基因表达与乳汁脂肪酸
4.1 引言
4.2 材料与方法
4.2.1 研究对象
4.2.2 实验试剂和仪器
4.2.3 实验方法
4.2.4 数据库建立
4.2.5 数据分析
4.2.6 技术路线
4.3 实验结果
4.3.1 基本情况
4.3.2 乳汁PUFA含量
4.3.3 FADS基因簇表达情况
4.3.4 FADS基因的m RNA表达与母乳PUFA
4.3.5 FADS基因的蛋白表达与母乳PUFA
4.4 讨论
4.5 小结
参考文献
附录
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢
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本文编号：
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