城市污水河道大肠杆菌抗生素与金属抗性研究
发布时间：2021-04-02 06:16
抗生素因具有良好的抑菌、杀菌作用被广泛应用于医药、农业和畜牧业领域。然而,被使用的抗生素高达75%被人体或动物排出体外进入环境,短时期内环境中抗生素难以降解导致大量的抗生素残留,使环境中的很多微生物产生耐药性,甚至引发了超级细菌的产生。除抗生素外,一些金属抗菌剂也被广泛应用于医药和农业等领域,相较于抗生素环境中的金属更难降解,不断地累积致使金属耐药菌株产生。为了增强抑菌效果,医药或农业领域会联合应用抗生素与金属药剂,可能催生抗生素与金属联合抗性细菌的出现。城市污水河道受人为活动的影响,可能作为抗性细菌的储库,给人类健康带来巨大威胁,研究河道中指示细菌的抗性分布情况,对于评估水环境受抗性细菌污染情况及潜在传播风险具有重要意义。本研究以中国寒区城市污水河道污泥为研究对象,首先解析肠杆菌科细菌组成,然后以肠杆菌科细菌的代表菌种大肠杆菌（Escherichia coli）为指示菌,研究了 17种抗生素和4种金属的耐药情况,并检测了相应的19种抗性相关基因及整合酶基因。研究结果如下:（1）在城市河道淤泥样品中,共分离出455株肠杆菌,鉴定结果显示包括Escherichia、Citrobacter...
【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－１采样点位置图??２．２．２实验药品与试剂???—?药品名称?来源??蛋白胨?北京奥星生物技术有限责任公司??
育树分析??取在０的片段处显色的ＰＣＲ产物，邮寄至哈尔滨擎科生物公司进行测序，待序列??返回后进行Ｇｅｎｂａｎｋ数据库比对。利用Ｍｅｇａ?６．０软件对所获得的序列构建系统发育树。??２．３结果与分析??２．３．１肠杆菌科细菌的分离结果??２０１８年６月，利用紫红胆盐葡萄糖琼脂（ＶＲＢＧ）从哈尔滨市马家沟河４个样点屮??共分离出４５５株肠杆菌，分别是Ｓ１?１３８株，Ｓ２?１４７株，Ｓ３?９２株，Ｓ４?７８株。具体实验??结果如下：??河道污泥经稀释，在紫红胆盐葡萄糖琼脂上生长情况如图２－２所示，可发现菌落呈??现出深紫红色，多分布于培养基表面和培养基中层，肠杆菌的微好氧和厌氧生活习性决??定了其在培养基中的生长分布情况。??图２－２紫红胆盐葡萄糖琼脂对肠杆菌的分离结果。ａ：?稀释液：ｂ：?１（＾稀释液。??挑取上述平板上的深紫红色菌落，作划线纯化，获得纯化Ｕ的菌落。阁２－３显示的??－１１．??
?东北林业大学硕士学位论文???是分离的代表性菌落，将划线分离后的肠杆菌进行液体培养，并用甘油冷冻法存于－??８０?°Ｃ冰箱待用。??图２－３肠杆菌平板划线纯化结果??２．３．２?￡．?ｃｏ／／筛选结果??利用ＴＢＸ培养基显色、吲哚试验、氧化酶试验从４５５株肠杆菌共筛选出１１０株￡??亡必，在四个样点的分布为３１２９株，８２?３０株，８３〗７株，５４?３４株。??２．３．２．１?ＴＢＸ培养基显色??挑取２．２．１上的白色菌落于ｒａｘ培养基上进行划线处理，生长情况如图２－４所示，??经观察，可发现图２－４－ａ上菌落呈蓝色，图２－４－ｂ上菌落呈白色，￡．ｃｏ／／中的ｐ－葡萄糖苷??酶（Ｐ－葡萄糖苷酶基因编码）可分解培养基中的Ｘ－葡萄糖苷酸（Ｘ－ｇｌｕｃ）产生深蓝色物??质５－溴－４－靛蓝，可判断蓝色菌落可能为尺ｃｏ／／，需进一步的吲哚试验和氧化酶试验验证。??ｉｐ?ｎ??ｗ?Ｉ??，．￡／?，ｒｉ??图２－４?ＴＢＸ培养基显色结果??２＿３．２．２吲哚试验??挑取２．２．２．１上的蓝色菌落于含有蛋白胨水培养液的螺纹管中，３７?°Ｃ培养２４?ｈ后，??进行吲哚试验验证，结果如图２－５所示，可发现菌液上的乙醚层呈现出玫瑰红色，Ｅ??ｃｏ／ｆ所产生的色氨酸酶分解蛋白胨水溶液中的色氨酸产生吲哚和丙酮酸，吲哚与乙醚层??－１２－??
【参考文献】：
期刊论文
[1]淮河流域浉河区水环境中抗生素污染分布特征分析研究[J]. 王大祥,王倩倩. 环境科学与管理. 2020(03)
[2]水环境中重金属的迁移转化及风险评价[J]. 李小超,岳小龙,张永慧. 广东化工. 2018(21)
[3]洪湖养殖区水环境中微生物的耐药性及其群落功能多样性研究[J]. 关川,童蕾,秦丽婷,刘慧. 农业环境科学学报. 2018(08)
[4]养殖废水产ESBLs大肠杆菌多重耐药性及耐药基因检测[J]. 李晴,张泽,曹甸磊,常维山,王慧,王雪鹏. 中国预防兽医学报. 2018(06)
[5]浅谈微生物转化土壤有机质的过程[J]. 赵建华. 现代农业. 2017(06)
[6]水环境中四环素类抗生素降解及去除研究进展[J]. 张杏艳,陈中华,邓海明,杨楷,龚胜,卢文学,蓝海恩. 生态毒理学报. 2016(06)
[7]喹诺酮抗性基因在城市污水处理系统中的分布及去除[J]. 李超,鲁建江,童延斌,刘江,李超道,郑晓伍. 环境工程学报. 2016(03)
[8]环境微生物的抗生素抗性和抗性组[J]. 田宝玉,马荣琴. 中国生物工程杂志. 2015(10)
[9]弗氏柠檬酸杆菌对动物和人致病性研究进展[J]. 薛巧,赵战勤,刘会胜,薛云,董发明. 动物医学进展. 2015(07)
[10]鲟源弗氏柠檬酸杆菌分离鉴定及药敏特性研究[J]. 杨移斌,夏永涛,赵蕾,郑卫东,邱军强,曹海鹏,胡鲲,杨先乐. 水生生物学报. 2013(04)
博士论文
[1]松花江流域哈尔滨段典型抗生素的归趋及风险政价[D]. 王伟华.东北林业大学 2018
[2]龟裂链霉菌土霉素途径特异激活子OtcR功能及应用研究[D]. 尹守亮.中国矿业大学(北京) 2017
[3]碳青霉烯不敏感大肠杆菌分子特征及NDM-1适应性代价研究[D]. 徐国锋.东北农业大学 2015
硕士论文
[1]城市水环境中抗生素及抗性基因污染特征研究[D]. 孙王茹.河北工程大学 2019
[2]环境水样中四环素的电化学分析方法研究[D]. 孙雪梅.成都理工大学 2017
[3]城市污水中肠杆菌的抗生素耐药性和多种耐药基因的检测[D]. 张博.东北农业大学 2013
本文编号：3114756
【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－１采样点位置图??２．２．２实验药品与试剂???—?药品名称?来源??蛋白胨?北京奥星生物技术有限责任公司??
育树分析??取在０的片段处显色的ＰＣＲ产物，邮寄至哈尔滨擎科生物公司进行测序，待序列??返回后进行Ｇｅｎｂａｎｋ数据库比对。利用Ｍｅｇａ?６．０软件对所获得的序列构建系统发育树。??２．３结果与分析??２．３．１肠杆菌科细菌的分离结果??２０１８年６月，利用紫红胆盐葡萄糖琼脂（ＶＲＢＧ）从哈尔滨市马家沟河４个样点屮??共分离出４５５株肠杆菌，分别是Ｓ１?１３８株，Ｓ２?１４７株，Ｓ３?９２株，Ｓ４?７８株。具体实验??结果如下：??河道污泥经稀释，在紫红胆盐葡萄糖琼脂上生长情况如图２－２所示，可发现菌落呈??现出深紫红色，多分布于培养基表面和培养基中层，肠杆菌的微好氧和厌氧生活习性决??定了其在培养基中的生长分布情况。??图２－２紫红胆盐葡萄糖琼脂对肠杆菌的分离结果。ａ：?稀释液：ｂ：?１（＾稀释液。??挑取上述平板上的深紫红色菌落，作划线纯化，获得纯化Ｕ的菌落。阁２－３显示的??－１１．??
?东北林业大学硕士学位论文???是分离的代表性菌落，将划线分离后的肠杆菌进行液体培养，并用甘油冷冻法存于－??８０?°Ｃ冰箱待用。??图２－３肠杆菌平板划线纯化结果??２．３．２?￡．?ｃｏ／／筛选结果??利用ＴＢＸ培养基显色、吲哚试验、氧化酶试验从４５５株肠杆菌共筛选出１１０株￡??亡必，在四个样点的分布为３１２９株，８２?３０株，８３〗７株，５４?３４株。??２．３．２．１?ＴＢＸ培养基显色??挑取２．２．１上的白色菌落于ｒａｘ培养基上进行划线处理，生长情况如图２－４所示，??经观察，可发现图２－４－ａ上菌落呈蓝色，图２－４－ｂ上菌落呈白色，￡．ｃｏ／／中的ｐ－葡萄糖苷??酶（Ｐ－葡萄糖苷酶基因编码）可分解培养基中的Ｘ－葡萄糖苷酸（Ｘ－ｇｌｕｃ）产生深蓝色物??质５－溴－４－靛蓝，可判断蓝色菌落可能为尺ｃｏ／／，需进一步的吲哚试验和氧化酶试验验证。??ｉｐ?ｎ??ｗ?Ｉ??，．￡／?，ｒｉ??图２－４?ＴＢＸ培养基显色结果??２＿３．２．２吲哚试验??挑取２．２．２．１上的蓝色菌落于含有蛋白胨水培养液的螺纹管中，３７?°Ｃ培养２４?ｈ后，??进行吲哚试验验证，结果如图２－５所示，可发现菌液上的乙醚层呈现出玫瑰红色，Ｅ??ｃｏ／ｆ所产生的色氨酸酶分解蛋白胨水溶液中的色氨酸产生吲哚和丙酮酸，吲哚与乙醚层??－１２－??
【参考文献】：
期刊论文
[1]淮河流域浉河区水环境中抗生素污染分布特征分析研究[J]. 王大祥,王倩倩. 环境科学与管理. 2020(03)
[2]水环境中重金属的迁移转化及风险评价[J]. 李小超,岳小龙,张永慧. 广东化工. 2018(21)
[3]洪湖养殖区水环境中微生物的耐药性及其群落功能多样性研究[J]. 关川,童蕾,秦丽婷,刘慧. 农业环境科学学报. 2018(08)
[4]养殖废水产ESBLs大肠杆菌多重耐药性及耐药基因检测[J]. 李晴,张泽,曹甸磊,常维山,王慧,王雪鹏. 中国预防兽医学报. 2018(06)
[5]浅谈微生物转化土壤有机质的过程[J]. 赵建华. 现代农业. 2017(06)
[6]水环境中四环素类抗生素降解及去除研究进展[J]. 张杏艳,陈中华,邓海明,杨楷,龚胜,卢文学,蓝海恩. 生态毒理学报. 2016(06)
[7]喹诺酮抗性基因在城市污水处理系统中的分布及去除[J]. 李超,鲁建江,童延斌,刘江,李超道,郑晓伍. 环境工程学报. 2016(03)
[8]环境微生物的抗生素抗性和抗性组[J]. 田宝玉,马荣琴. 中国生物工程杂志. 2015(10)
[9]弗氏柠檬酸杆菌对动物和人致病性研究进展[J]. 薛巧,赵战勤,刘会胜,薛云,董发明. 动物医学进展. 2015(07)
[10]鲟源弗氏柠檬酸杆菌分离鉴定及药敏特性研究[J]. 杨移斌,夏永涛,赵蕾,郑卫东,邱军强,曹海鹏,胡鲲,杨先乐. 水生生物学报. 2013(04)
博士论文
[1]松花江流域哈尔滨段典型抗生素的归趋及风险政价[D]. 王伟华.东北林业大学 2018
[2]龟裂链霉菌土霉素途径特异激活子OtcR功能及应用研究[D]. 尹守亮.中国矿业大学(北京) 2017
[3]碳青霉烯不敏感大肠杆菌分子特征及NDM-1适应性代价研究[D]. 徐国锋.东北农业大学 2015
硕士论文
[1]城市水环境中抗生素及抗性基因污染特征研究[D]. 孙王茹.河北工程大学 2019
[2]环境水样中四环素的电化学分析方法研究[D]. 孙雪梅.成都理工大学 2017
[3]城市污水中肠杆菌的抗生素耐药性和多种耐药基因的检测[D]. 张博.东北农业大学 2013
本文编号：3114756
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/yufangyixuelunwen/3114756.html
