得克隆的类雌激素效应研究

发布时间：2017-04-24 13:18

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【摘要】：得克隆(Dechlorane Plus,DP)是一种使用量巨大的氯代阻燃剂,广泛地存在于各种环境和生物介质中,具有生物富集性。目前关于DP的毒性效应及作用机制研究非常有限,未见其具有内分泌干扰效应的研究报道。本课题组前期研究发现,DP可诱导雄性斑马鱼卵黄蛋白酶原(vtg)基因的表达、导致人乳腺癌细胞MCF-7的增殖。本研究按照OECD内分泌干扰物第二阶段筛选标准,通过体外(in vitro)测试,确定DP的类雌激素效应,并对其可能的分子机制进行初步探讨。本研究将为评价DP的生物毒性和生态风险提供科学依据。本论文的研究结果表明,DP能够诱导MCF-7细胞的增殖,且具有时间-和剂量-效应；雌激素受体(ER)拮抗剂ICI182780能够显著性抑制DP引起的MCF-7细胞增殖；DP对MCF-7细胞的周期未见显著性影响；基因和蛋白的定量分析初步表明,DP可诱导ER及MAPK/ERK通路中靶基因c-myc和c-fos的表达,推测DP可能通过直接干扰受体的合成、ER介导的基因组或非基因组途径发挥类雌激素作用。
【关键词】：得克隆 类雌激素效应 MCF-7细胞 雌激素受体 MAPK/ERK通路
【学位授予单位】：大连海事大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R114
【目录】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-9
• 引言9-10
• 第1章 绪论10-23
• 1.1 得克隆的相关研究10-13
• 1.1.1 得克隆的理化性质10-11
• 1.1.2 得克隆的研究进展11-13
• 1.1.3 本课题组关于DP毒性效应的研究13
• 1.2 环境雌激素效应的相关研究13-22
• 1.2.1 环境雌激素简介13-14
• 1.2.2 环境雌激素特点14-15
• 1.2.3 环境雌激素生物学效应15-17
• 1.2.4 环境雌激素作用的分子机制17-21
• 1.2.5 环境雌激素的筛选及其检测方法21-22
• 1.3 本课题的目的及意义22-23
• 第2章 材料与方法23-41
• 2.1 实验材料23-24
• 2.1.1 细胞系23
• 2.1.2 得克隆23
• 2.1.3 主要仪器设备23-24
• 2.2 实验方法24-40
• 2.2.1 常用试剂24-26
• 2.2.2 MCF-7细胞复苏、传代、冻存26-28
• 2.2.3 不同剂量DP暴露对MCF-7细胞增殖的影响28-29
• 2.2.4 DP及拮抗剂ICI182780对MCF-7细胞增殖的时间-及剂量-效应29
• 2.2.5 DP暴露对MCF-7细胞周期的影响29-30
• 2.2.6 目的基因的实时荧光定量PCR检测30-35
• 2.2.7 ERα和AhR的Western blot检测35-40
• 2.3 技术路线40-41
• 第3章 结果与讨论41-61
• 3.1 DP暴露对MCF-7细胞生物学效应研究41-46
• 3.1.1 不同剂量DP暴露对MCF-7细胞增殖影响41-42
• 3.1.2 DP及拮抗剂ICI182780对MCF-7细胞增殖的时间-及剂量-效应42-45
• 3.1.3 DP暴露对MCF-7细胞周期的影响45-46
• 3.2 DP类雌激素作用机制的研究46-61
• 3.2.1 RNA提取、反转录及质量验证46-50
• 3.2.2 实时荧光定量PCR检测体系的优化50-52
• 3.2.3 DP暴露MCF-7细胞总蛋白的浓度测定及条件优化52
• 3.2.4 DP暴露对MCF-7细胞ER及ER介导的基因组途径研究52-56
• 3.2.5 DP暴露对MCF-7细胞AhR及AhR介导的基因组途径研究56-58
• 3.2.6 DP类雌激素作用非基因组途径研究58-61
• 结论61-62
• 参考文献62-70
• 附录A DP暴露对MCF-7细胞周期的影响70-75
• 附录B DP暴露及拮抗剂ICI182780对MCF-7细胞的影响75-77
• 攻读学位期间公开发表论文77-78
• 致谢78-79
• 作者简介79

【参考文献】

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1 徐孝娜;镉对MCF-7人乳腺癌细胞生长的影响及其机制研究[D];第四军医大学;2013年

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