TFEB介导的溶酶体功能障碍在PBDE-47致PC12细胞损伤中的作用

发布时间：2021-09-22 03:33

　　目的:溴代阻燃剂多溴联苯醚（Polybrominated diphenyl ethers,PBDEs）的神经毒性受到人们的广泛关注,已有证据表明PBDEs神经毒性与自噬异常有关,但具体作用机制尚不清楚。本研究旨在探讨环境和人体中含量最多、毒性最强的PBDEs同系物之一的2,2’,4,4’-四溴联苯醚（2,2’,4,4’-tetrabromodiphenylether,PBDE-47）对大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤PC12细胞溶酶体功能和自噬流的影响,同时阐明转录因子EB（Transcription factor EB,TFEB）在PBDE-47致PC12细胞损伤中所扮演的角色,从而为进一步研究PBDEs神经毒性的机制及治疗提供实验依据。方法:不同剂量PBDE-47（1、10、20μmol/L）处理PC12细胞24 h后,采用western blot检测TFEB、溶酶体相关膜蛋白1（lysosome-associated membrane glycoprotein 1,LAMP1）、溶酶体内和溶酶体外及总组织蛋白酶B（cathepsin B,Cat-B）、以及突触体相关蛋白29（Synapt... 

【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

PBDE-47对溶酶体膜通透性的影响

图 2 lysotracker 染色 PBDE-47 处理的 PC12 细胞2.3 PBDE-47 对 PC12 细胞溶酶体相关蛋白的影响不同剂量 PBDE-47（1 μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L）处理 PC12 细胞后，western blot 检测溶酶体相关蛋白 LAMP1、Cat-B 蛋白表达水平。结果如图 3 所示，与对照组相比，10 μmol/L 及 20 μmol/L PBDE-47 染毒组中，LAMP1 蛋白表达水平显著下降（P < 0.05），而 1 μmol/L、10 μmol/L 及 20 μmol/L PBDE-47 染毒组中，Cat-B 蛋白表达水平均显著下降（P < 0.05）。表明 PBDE-47 可使溶酶体相关蛋白的表达水平下降。

图 3 PBDE-47 对 PC12 细胞溶酶体相关蛋白的影响注：（a）LAMP1 蛋白条带；（b）Cat-B 蛋白条带；（c）LAMP1 蛋白表达水平统计图；（d）Cat-B 蛋白表达水平统计图。与对照组相比，*P < 0.05。2.4 PBDE-47 对 PC12 细胞自噬体与溶酶体融合的影响Ad-mCherry-GFP-LC3B 转染 PC12 细胞后，不同剂量 PBDE-47（1 μmol/L、10μmol/L、20 μmol/L）处理 PC12 细胞。通过共聚焦显微镜观察自噬体与溶酶体的融合情况，结果如图 4 所示，对照组呈现出弥散的黄色荧光，随着 PBDE-47 染毒浓度的增加，细胞体积缩小，弥散性黄光减少，红色斑点变多，20 μmol/L PBDE-47组出现了明显的黄色斑点。表明 PBDE-47 阻碍了自噬体与溶酶体的融合。

【参考文献】：
期刊论文
[1]PBDEs研究的最新进展[J]. 罗孝俊,麦碧娴,陈社军.  化学进展. 2009(Z1)



本文编号：3403054