在线固相萃取-液相色谱-串联质谱法检测蘑菇中毒患者尿液中痕量α-鹅膏毒肽

发布时间：2021-11-24 12:38

　　建立了在线固相萃取-液相色谱-串联质谱（online SPE-LC-MS/MS）测定蘑菇中毒患者尿液中痕量α-鹅膏毒肽的分析方法。样品经甲酸酸化的乙腈-甲醇（5∶1, v/v）沉淀蛋白质,反相液液微萃取去除样品提取液中的有机溶剂,毒素经ODS微柱（5 mm×2.1 mm, 5μm）在线SPE净化,XBridge^TM BEH C₁₈色谱柱（150 mm×3.0 mm, 2.5μm）分离,MS/MS测定。采用基于定量环的快速阀切换技术作为在线SPE和LC-MS/MS模块的接口,使得两个分离模块互相独立,无论是流动相还是压力,都不会互相干扰,保证了系统的稳定性;在线系统的精准净化,有效消除了后续质谱检测的基质效应,确保了尿液中痕量水平α-鹅膏毒肽的定性定量检测。尿液中α-鹅膏毒肽在0.1～50μg/L范围内线性关系良好,相关系数（r²）为0.998 3;检出限（LOD）为0.03μg/L;α-鹅膏毒肽的加标（0.1、2.0和20μg/L）平均回收率为84.3%～91.7%,相对标准偏差（RSD）为3.8%～7.2%。体内鹅膏毒... 

【文章来源】：色谱. 2020,38(11)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

在线SPE-LC-MS/MS系统流路切换示意图

在线SPE分离除了实现高效的净化,还要保证洗脱液与后续LC-MS/MS进样分离的兼容性,关键是要保证较窄的SPE洗脱色谱峰,以满足后续200 μL定量环的收集容量,以及需要保证洗脱液中较低比例的有机相,以防止后续液相色谱分离时的峰展宽。实验中,将图1中色谱流动相流速设为0 mL/min, SPE模块按正常分析,将废液端直接连接到质谱仪,以监测在线SPE的分离效果。改变在线SPE洗脱梯度程序中2.0～3.0 min时甲醇的比例,使其分别为30%、35%和40%,结果见图2。按流速0.5 mL/min 计算,甲醇比例为30%时,收集2.05～2.45 min的洗脱液正好满足定量环的收集容量,且此时有机相比例最低。2.3 在线SPE与LC-MS/MS切换

根据文献[16]报道的离线SPE柱(HLB柱,60 mg/3 mL,美国Waters公司)净化方法操作,结果见图3c,其响应值低于在线净化的50%,且离线净化后的基线噪声太高,在0.5 μg/L 这个水平很难分辨是否为α-鹅膏毒肽阳性。2.5 质谱检测

【参考文献】：
期刊论文
[1]血浆和尿液中6种鹅膏毒肽和鬼笔毒肽的超高效液相色谱-串联质谱法测定[J]. 肖绍震,林锋,傅武胜,魏道智.  食品科学. 2018(22)
[2]12种剧毒鹅膏菌的肽类毒素成分鉴定及其相对含量差异比较研究[J]. 魏佳会,吴剑峰,陈佳,吴弼东,陈作红,刘畅,谢剑炜.  分析化学. 2017(06)
[3]在线液相色谱-二极管阵列检测器-串联质谱法检测野生菌中鹅膏毒肽和鬼笔毒肽[J]. 徐小民,张京顺,蔡增轩,张晶,黄百芬,许娇娇,陈苘.  色谱. 2017(06)
[4]超高效液相色谱三重四极杆质谱联用法快速检测尿液和血浆中鹅膏毒肽和鬼笔毒肽[J]. 张秀尧,蔡欣欣.  分析化学. 2010(01)
[5]我国28种鹅膏菌主要肽类毒素的检测分析[J]. 陈作红,胡劲松,张志光,张平,李东屏.  菌物系统. 2003(04)



本文编号：3515999