MPLA对雄性小鼠生殖系统的辐射防护作用及机制研究
发布时间：2022-01-14 07:12
一、研究背景随着核能利用的日益广泛,对电离辐射暴露的防护也逐渐的到人们的重视。研究发现,电离辐射可导致生物体细胞DNA损伤,继而导致细胞遗传物质受损甚至细胞死亡。人体各种组织器官的辐射敏感性差异较大,雄性生殖系统的主要器官睾丸对电离辐射十分敏感,2Gy以上暴露于电离辐射可直接导致精原细胞,精原干细胞死亡,精曲小管内皮损伤等。因此寻找雄性生殖系统辐射防护的新方法是一个亟待解决的科学问题。Toll样受体（TLRs）是一类广泛存在的模式识别受体,参与抗原识别,肿瘤免疫,抗病毒等多种病理生理过程。在人们寻找有效辐射防护方法的过程中,逐渐发现,通过激活某些Toll样受体可产生一定的辐射防护作用。这其中又以激活TLR4辐射防护效果最为显著,提示TLR4在辐射防护中的重要作用。然而,传统TLR4激动剂内毒素（LPS）是一种由细菌细胞壁分离得到的成分,具有极强的免疫原性,由于毒性较大,严重制约了其在辐射防护中的应用。在后续的研究中,人们通过水解反应等一系列步骤,以LPS为原料,成功制备出一种减毒的TLR4激动剂,即单磷酰脂质A（MPLA）。MPLA是一种高效的TLR4激动剂,目前主要作为免疫佐剂应用于...
【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校
【文章页数】：82 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
1MPLA和LPS化学结构图
每日观察，当细胞克隆大小长至符合计数要求时（直径 2-3mm，孵育时间约 1 周），弃去上清，使用 PBS 清洗 3 遍，吸净 PBS，使用冰无水乙醇固定 3 分钟，弃去无水乙醇，使用结晶紫染液染色 15-20 分钟，到时后清水洗净结晶紫，反扣晒干。进行克隆计数并代入计算公式进行克隆形成率计算。6. 统计方法：本实验所有数据均使用 GRAPH PAD 10 分析，组内差异采用 t 检验分析，组间差别采用单因素方差分析（ANOVA），每组内至少设置 3 重复，P<0.05（*）或 P<0.01(**)有统计学意义。三、实验结果（一）MPLA 减轻小鼠睾丸照射后的组织结构损伤通过实验发现，照射前使用 MPLA 处理小鼠明显减轻了小鼠照后 1 天，7 天及21 天睾丸的组织结构损伤，具体表现为：MPLA 给药组小鼠睾丸组织结构维持相对完整，精曲小管内细胞充实，坏死细胞较少，空腔明显少于单纯照射组。另外，我们发现，MPLA 不对未照射小鼠的睾丸结构产生明显影响。
图 2.3.2 MPLA 减轻照后第 21 天小鼠睾丸组织结构损伤）MPLA 有效缓解辐射导致的 2 倍体细胞数量减少生精小管内单倍体细胞主要由分化完成的精子构成，2 倍体细胞多为精原细胞4 倍体细胞则多是是精原细胞形成的初级精母细胞组成[20]。在照射后 24h，用流式细胞仪对小鼠睾丸内细胞进行流式细胞学分析，发现照射明显导致 2 倍数量减少，提示照射主要对精原细胞起到杀伤作用，而使用 MPLA 则明显缓射导致 2 倍体细胞数量减少这一趋势，提示 MPLA 在体内可对精原细胞起到射防护作用，并可能使更多细胞进入细胞检查点以增加 DNA 损伤修复机会。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Toll样受体5激动剂CBLB502对7.0Gy 60Coγ射线照射恒河猴的辐射防护作用观察[J]. 申星,熊国林,谢玲,郭玲玲,李明,赵艳芳,王磊,洪剑,杨萌,赵黎,彭瑞云,王勇,杨晓明,罗庆良,余祖胤,葛常辉,邢爽. 解放军医学杂志. 2015(04)
[2]Toll样受体信号通路中MyD88的研究进展[J]. 吴燕燕,王易. 免疫学杂志. 2012(03)
[3]Toll样受体在辐射防护中的作用[J]. 张超,蔡建明. 第二军医大学学报. 2010(02)
[4]辐射防护药物的研究现状[J]. 李科研,黄荣清,肖炳坤,杨建云. 中国辐射卫生. 2009(01)
[5]去颌下腺对大鼠睾丸、附睾重量、精子计数及3β-HSD表达的影响[J]. 王晨阳,徐会茹,侯林,蒋超,黄祝,姚兵. 临床检验杂志. 2007(02)
[6]Toll样受体（TLRs）的信号转导与免疫调节[J]. 王海坤,韩代书. 生物化学与生物物理进展. 2006(09)
[7]细胞周期调控与肿瘤[J]. 邹向阳,李连宏. 国际遗传学杂志. 2006(01)
[8]辐射防护药物的研究现状[J]. 荆丽艳,刘令梅. 社区医学杂志. 2004(04)
[9]流式细胞仪在睾丸生精过程研究中的应用[J]. 朱虎. 国外医学(计划生育分册). 2001(01)
本文编号：3588062
【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校
【文章页数】：82 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
1MPLA和LPS化学结构图
每日观察，当细胞克隆大小长至符合计数要求时（直径 2-3mm，孵育时间约 1 周），弃去上清，使用 PBS 清洗 3 遍，吸净 PBS，使用冰无水乙醇固定 3 分钟，弃去无水乙醇，使用结晶紫染液染色 15-20 分钟，到时后清水洗净结晶紫，反扣晒干。进行克隆计数并代入计算公式进行克隆形成率计算。6. 统计方法：本实验所有数据均使用 GRAPH PAD 10 分析，组内差异采用 t 检验分析，组间差别采用单因素方差分析（ANOVA），每组内至少设置 3 重复，P<0.05（*）或 P<0.01(**)有统计学意义。三、实验结果（一）MPLA 减轻小鼠睾丸照射后的组织结构损伤通过实验发现，照射前使用 MPLA 处理小鼠明显减轻了小鼠照后 1 天，7 天及21 天睾丸的组织结构损伤，具体表现为：MPLA 给药组小鼠睾丸组织结构维持相对完整，精曲小管内细胞充实，坏死细胞较少，空腔明显少于单纯照射组。另外，我们发现，MPLA 不对未照射小鼠的睾丸结构产生明显影响。
图 2.3.2 MPLA 减轻照后第 21 天小鼠睾丸组织结构损伤）MPLA 有效缓解辐射导致的 2 倍体细胞数量减少生精小管内单倍体细胞主要由分化完成的精子构成，2 倍体细胞多为精原细胞4 倍体细胞则多是是精原细胞形成的初级精母细胞组成[20]。在照射后 24h，用流式细胞仪对小鼠睾丸内细胞进行流式细胞学分析，发现照射明显导致 2 倍数量减少，提示照射主要对精原细胞起到杀伤作用，而使用 MPLA 则明显缓射导致 2 倍体细胞数量减少这一趋势，提示 MPLA 在体内可对精原细胞起到射防护作用，并可能使更多细胞进入细胞检查点以增加 DNA 损伤修复机会。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Toll样受体5激动剂CBLB502对7.0Gy 60Coγ射线照射恒河猴的辐射防护作用观察[J]. 申星,熊国林,谢玲,郭玲玲,李明,赵艳芳,王磊,洪剑,杨萌,赵黎,彭瑞云,王勇,杨晓明,罗庆良,余祖胤,葛常辉,邢爽. 解放军医学杂志. 2015(04)
[2]Toll样受体信号通路中MyD88的研究进展[J]. 吴燕燕,王易. 免疫学杂志. 2012(03)
[3]Toll样受体在辐射防护中的作用[J]. 张超,蔡建明. 第二军医大学学报. 2010(02)
[4]辐射防护药物的研究现状[J]. 李科研,黄荣清,肖炳坤,杨建云. 中国辐射卫生. 2009(01)
[5]去颌下腺对大鼠睾丸、附睾重量、精子计数及3β-HSD表达的影响[J]. 王晨阳,徐会茹,侯林,蒋超,黄祝,姚兵. 临床检验杂志. 2007(02)
[6]Toll样受体（TLRs）的信号转导与免疫调节[J]. 王海坤,韩代书. 生物化学与生物物理进展. 2006(09)
[7]细胞周期调控与肿瘤[J]. 邹向阳,李连宏. 国际遗传学杂志. 2006(01)
[8]辐射防护药物的研究现状[J]. 荆丽艳,刘令梅. 社区医学杂志. 2004(04)
[9]流式细胞仪在睾丸生精过程研究中的应用[J]. 朱虎. 国外医学(计划生育分册). 2001(01)
本文编号：3588062
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