铝暴露对SH-SY5Y细胞中BRCA1调控Nrf2水平及稳定性影响的研究

发布时间：2022-11-03 23:27

　　目的:铝（aluminum,Al）是一种重要的神经毒物,脑是铝主要的蓄积部位和重要的靶器官,慢性铝暴露与神经退行性疾病的发生密切相关。之前的研究表明,铝诱导的氧化应激通常发生在中枢神经系统（CNS）,乳腺癌易感基因1（breast cancer susceptibility gene1,BRCA1）可能在其中发挥重要作用。本研究通过检测铝暴露对SH-SY5Y细胞氧化损伤,线粒体损伤及BRCA1、Nrf2表达的影响,来探讨铝暴露导致神经元发生神经退行性改变的可能机制。研究方法:NSE免疫荧光法对SH-SH5Y细胞进行神经元特性鉴定。采用CCK-8法测定细胞活力,确定铝和抗氧化剂槲皮素的暴露剂量及暴露时间。光学显微镜观察细胞形态。试剂盒法测定细胞MDA、GSH水平。ELISA法测定细胞ATP水平。流式细胞术测定细胞凋亡/坏死率,线粒体膜电位。RT-PCR检测Brca1和Nrf2及其下游Gclc、Ho-1、Nqo1 mRNA水平。Western印迹分析检测BRCA1、NRF2及其下游NQO1、GCLC、HO-1的蛋白表达水平。免疫共沉淀法测定BRCA1与NRF2蛋白间相互作用及Nrf2泛素化... 

【文章页数】：73 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
英文缩略语
1 前言
2 材料与方法
    2.1 主要试剂和仪器
        2.1.1 主要试剂
        2.1.2 主要仪器
    2.2 主要溶液配制
    2.3 实验条件的无毒化处理
    2.4 SH-SY5Y细胞培养
    2.5 SH-SY5Y神经元特性鉴定
    2.6 铝暴露剂量及干预剂剂量的选择
    2.7 铝暴露对SH-SY5Y细胞形态学的影响
    2.8 铝暴露对细胞氧化指标的测定
    2.9 铝暴露对细胞凋亡/坏死率的测定
    2.10 铝暴露对细胞ATP水平的测定
    2.11 铝暴露对细胞线粒体膜电位的测定
    2.12 Brca1、Nrf2、Gclc、Ho-1、Nqo1的m RNA水平测定
    2.13 BRCA1、NRF2、GCLC、HO-1、NQO1 的蛋白水平测定
    2.14 FSK对 BRCA1与Nrf2 表达的影响
    2.15 BRCA1与Nrf2 免疫荧光共定位
    2.16 铝暴露对BRCA1与Nrf2 相互作用的测定
    2.17 铝暴露对Nrf2泛素化水平的测定
    2.18 统计学分析
3 实验结果
    3.1 SH-SY5Y神经元特性鉴定
    3.2 铝暴露剂量的选择
    3.3 抗氧化剂剂量的确定
        3.3.1 不同浓度QUE暴露对对照组细胞活力的影响
        3.3.2 不同浓度QUE暴露对高剂量组细胞活力的影响
    3.4 铝暴露及QUE干预对SH-SY5Y细胞形态学的影响
    3.5 铝暴露及QUE干预对细胞GSH水平的影响
    3.6 铝暴露及QUE干预对细胞MDA水平的影响
    3.7 铝暴露及QUE干预对细胞凋亡/坏死率的影响
    3.8 铝暴露及QUE干预对细胞ATP水平的影响
    3.9 铝暴露及QUE干预对细胞线粒体膜电位的影响
    3.10 铝暴露及QUE干预对细胞BRCA1 m RNA和蛋白水平的影响
    3.11 铝暴露及QUE干预对细胞Nrf2、GCLC、HO-1、NQO1 m RNA和蛋白水平的影响
    3.12 FSK干预对铝暴露神经细胞BRCA1及Nrf2 水平的影响
    3.13 铝暴露神经细胞BRCA1与Nrf2 免疫荧光共定位
    3.14 铝暴露对BRCA1与Nrf2 相互作用的影响
    3.15 铝暴露对Nrf2泛素化水平的影响
4 讨论
5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
实践报告
在学期间科研成绩
致谢
个人简历



本文编号：3700823