壬基酚暴露通过Wnt-Dvl-GSK-3β信号通路影响轴突发育的机制研究

发布时间：2022-12-17 12:02

　　目的:壬基酚（nonylphenol,NP）是典型的持久性有机污染物（POPs）,对环境污染严重。中枢神经系统（CNS）在发育期对POPs非常敏感。越来越多的证据表明,发育期NP暴露会损害CNS。轴突是CNS的基本和必要结构,而发育期NP暴露会对轴突的影响亟待开展。因此,我们建立了发育期NP暴露模型,研究NP对子代海马轴突发育的影响;将NP直接作用于体外培养的神经元,观察其对轴突发育的损害。在上述研究基础上,我们深入探讨了Wnt-Dvl-GSK-3β信号通路的变化与NP暴露引起轴突损伤之间的关系。实验方法:1.将妊娠Wistar大鼠随机分为对照组和NP处理组。从妊娠第0天（GD0）至子代出生后第21天（PN21）,NP染毒组通过灌胃给予不同剂量的NP（10,50,100 mg/kg/day）,对照组每天给予玉米油灌胃。PN21和PN80时,对子代海马进行Bielschowsky染色和免疫荧光染色实验,观察轴突形态改变;进行免疫印迹实验检测轴突发育相关蛋白CRMP-2及其上游信号通路Wnt-DvlGSK-3β相关蛋白的表达变化。2.取新生Wistar大鼠皮质提取神经元进行原代培养。用终浓... 

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
英文缩略语
1 前言
2 材料和方法
    2.1 主要试剂和仪器
        2.1.1 主要试剂
        2.1.2 主要仪器
    2.2 发育期NP暴露模型的建立
    2.3 Bielschowsky染色
    2.4免疫荧光实验
    2.5 组织免疫印迹试验(Western blot)分析
    2.6 神经元原代培养
        2.6.1 原代大鼠神经元的培养
        2.6.2 原代大鼠神经元细胞NP及拮抗剂暴露模型的建立
    2.7原代大鼠神经元细胞免疫荧光实验
    2.8 原代大鼠神经元细胞免疫印迹试验(Western blot)分析
    2.9 原代大鼠神经元细胞FM1-43 荧光染料摄取与释放实验
    2.10 统计学分析
3 结果
    3.1 发育期NP暴露对仔鼠海马神经元轴突发育的影响
    3.2 发育期NP暴露改变仔鼠海马CRMP-2和p-CRMP-2 蛋白的表达水平
    3.3 发育期NP暴露激活仔鼠海马Wnt-Dvl-GSK-3β信号通路
        3.3.1 发育期NP暴露激活仔鼠海马的GSK-3β
        3.3.2 发育期NP暴露降低仔鼠海马的Dvl蛋白表达
        3.3.3 发育期NP暴露降低仔鼠海马的Wnt蛋白表达
    3.4 NP暴露导致原代培养神经元轴突损伤
        3.4.1 NP暴露导致原代培养神经元轴突形态损伤
        3.4.2 NP暴露导致原代培养神经元轴突功能损伤
    3.5 NP暴露改变原代培养神经元CRMP-2和p-CRMP-2 蛋白的表达水平
    3.6 NP暴露激活原代培养神经元中Wnt-Dvl-GSK-3β信号通路
        3.6.1 NP暴露激活原代培养神经元的GSK-3β蛋白
        3.6.2 NP暴露降低原代培养神经元的Dvl蛋白表达
        3.6.3 NP暴露降低原代培养神经元的Wnt蛋白表达
    3.7 SB-216763 减弱了NP所致的原代培养神经元轴突损伤
        3.7.1 SB-216763 减轻了NP所致的原代培养神经元轴突长度减少
        3.7.2 SB-216763 减轻了NP所致的原代培养神经元轴突功能损伤
        3.7.3 SB-216763 恢复了NP所致的原代培养神经元CRMP-2和p-CRMP-2的表达变化
4 讨论
5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述 壬基酚的神经毒性及机制的研究进展
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历



本文编号：3719895