砷对正常膀胱上皮细胞癌基因HER2表达的影响及其机制研究

发布时间：2023-03-04 03:26

　　目的:砷是自然界中广泛存在的类金属元素,可通过呼吸道、消化道和皮肤等途径进入体内,造成多器官、系统的损伤。我们学院和瑞士联邦水研究院合作开发的“砷污染风险评估模型”,预测我国高砷暴露人口可能高达2000万。砷是国际癌症研究属确定的人类致癌物,可引起皮肤癌、肺癌和膀胱癌。研究显示,不仅持续性砷暴露可引起肿瘤,而且在停止砷暴露几十年后,膀胱癌和肺癌的发生风险仍然很高。我们研究组体外细胞实验已观察到长期低浓度亚砷酸钠处理的人正常膀胱上皮细胞增殖速度明显加快,出现恶性转化倾向。因此,探索砷致膀胱癌机制,寻找有效的预防控制措施和治疗方案尤为重要。由于砷本身不引起点突变,对其致癌机制的研究更多倾向于后生化机制,即通过扰乱特殊位点的外遗传控制,导致异常基因表达而致癌。我们先前的研究发现低浓度砷能够诱导人正常膀胱上皮细胞原癌基因表皮生长因子受体2(HER2)表达增高。HER2是表皮生长因子受体(EGFR)家族成员,其活化后,可激活多条与细胞增殖、生存、侵润和血管发生有关的信号通路,在乳腺癌、膀胱癌、胃癌、肺癌等多种肿瘤中高表达。由于HER2在上皮癌的发生、发展、侵润和转移中发挥重要作用。因此,如果能以...

【文章页数】：103 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 :长期砷处理对F344大鼠膀胱上皮细胞癌基因HER2及相关细胞因子和增殖因子的影响
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 主要试剂与仪器
            2.1.1 主要试剂
            2.2.2 主要仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 动物分组及染毒
            2.2.2 尿中砷含量测定
            2.2.3 免疫荧光
            2.2.4 免疫组织化学
            2.2.5 ELISA实验
            2.2.6 RNA提取、RT-PCR和 Real-time PCR检测
            2.2.7 统计学分析
    3 结果
        3.1 F344大鼠的一般情况
        3.2 F344大鼠尿中砷形态含量
        3.3 长期砷处理导致F344大鼠膀胱上皮增生
        3.4 长期砷处理对大鼠膀胱上皮细胞EGFR和 HER2蛋白及磷酸化表达的影响
        3.5 长期砷处理对大鼠膀胱上皮细胞EGF,TGFα,E-cad,s E-cad蛋白表达的影响
        3.6 长期砷处理对大鼠膀胱上皮细胞HSP90,IL-6,NDRG1蛋白表达的影响
        3.7 长期砷处理对大鼠膀胱上皮细胞增殖因子蛋白表达影响
    4 讨论
    5 结论
第二部分 :短期砷处理对膀胱上皮细胞癌基因HER2及相关细胞因子的影响
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 主要试剂与仪器
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 细胞培养与处理
            2.2.2 细胞免疫荧光
            2.2.3 RNA提取、RT-PCR和 Real-time PCR检测
            2.2.4 细胞免疫共沉淀
            2.2.5 蛋白提取
            2.2.6 Western blot免疫印迹检测蛋白表达
            2.2.7 统计学分析
    3 结果
        3.1 短期亚砷酸钠染毒对SV-HUC-1细胞HER2表达及磷酸化的影响
        3.2 短期亚砷酸钠染毒对SV-HUC-1细胞EGFR表达及磷酸化的影响
        3.3 在短期亚砷酸钠处理的SV-HUC-1细胞中,EGFR参与HER2磷酸化的激活
        3.4 短期亚砷酸钠染毒对SV-HUC-1细胞外生长因子表达的影响
        3.5 在短期亚砷酸钠处理的SV-HUC-1细胞中,EGF参与HER2磷酸化的激活
        3.6 在短期亚砷酸钠处理的SV-HUC-1细胞中,TGFα参与HER2磷酸化的激活
        3.7 在短期亚砷酸钠处理的SV-HUC-1细胞中,E-cad不参与HER2磷酸化的激活
        3.8 短期亚砷酸钠染毒对SV-HUC-1细胞内HSP90,NDRG1,IL-6表达的影响
        3.9 在短期亚砷酸钠处理的SV-HUC-1细胞中,HSP90对HER2磷酸化的影响
        3.10 在短期亚砷酸钠处理的SV-HUC-1细胞中,IL-6,NDRG1对HER2磷酸化的影响
    4 讨论
    5 结论
第三部分 :长期砷处理对膀胱上皮细胞癌基因HER2及相关细胞因子和增殖因子的影响
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 主要试剂与仪器
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 细胞培养与处理
            2.2.2 细胞活力测定
            2.2.3 细胞划痕实验
            2.2.4 细胞迁移实验
            2.2.5 ELISA实验
            2.2.6 蛋白提取
            2.2.7 Western blot免疫印迹检测蛋白表达
            2.2.8 统计学分析
    3 结果
        3.1 长期砷处理引起SV-HUC-1细胞明显增生
            3.1.1 长期砷处理对SV-HUC-1细胞活力,增殖迁移水平的影响
            3.1.2 长期砷处理对SV-HUC-1细胞相关细胞因子蛋白表达影响
        3.2 长期砷处理SV-HUC-1细胞导致EGFR和HER2激活的相关因素
            3.2.1 长期砷处理SV-HUC-1细胞增殖和迁移中的EGFR和HER2作用
            3.2.2 长期砷处理SV-HUC-1细胞中参与EGFR和HER2激活的相关因子作用
            3.2.3 长期砷处理SV-HUC-1细胞中EGF,TGFα,HSP90激活EGFR和HER2磷酸化的作用
            3.2.4 长期砷处理SV-HUC-1细胞中E-cad,IL-6,NDRG1抑制EGFR和HER2磷酸化的作用
    4 讨论
    5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简介



本文编号：3753637