镉对破骨细胞分化过程中Rho GTPases信号通路的影响及分子机理

发布时间：2023-03-23 19:40

　　镉是一种有毒重金属,也是一种分布广泛的环境污染物。研究发现,环境镉暴露水平与骨密度降低有密切联系。作为机体主要的代谢过程,“骨重建”是维持骨骼正常发育所必需的,其失衡可能严重影响骨骼的形态和功能。破骨细胞是体内唯一具有骨吸收活性的多核巨细胞,其在骨重建活动中发挥着重要作用,活性或数量的变化均会造成骨重建失衡,引发骨质疏松类疾病。近年来研究发现Rho GTPases在破骨细胞分化过程中发挥重要作用。然而,镉对破骨细胞分化的影响及其过程中Rho GTPases信号通路的调控机制尚不明确。本文从体内和体外研究镉对破骨细胞分化的影响及Rho GTPases信号通路的调控,为进一步揭示镉对骨的毒性机制提供科学依据。1.镉暴露对小鼠骨组织破骨细胞分化的影响将36只5周龄雌性BALB/c小鼠随机分为三组,分别饮用浓度为0、5、25mg/L的镉水,持续16周,每周统计饮水和采食量。试验结束后,采集全血、血清和尿液,剖杀小鼠采集骨组织。利用原子吸收光谱法测定全血、尿液、前肢骨的镉含量,生化仪测定血清碱性磷酸酶(ALP)活性和血清钙、磷(Ca、P)含量及尿液Ca、P含量,原子吸收分光光度法测定前肢骨中Ca...

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中文摘要
ABSTRACT
缩略词表
第一部分 文献综述
    第一章 镉的毒性机制研究进展
        1. 镉对机体的毒理机制
        2. 镉对骨的损伤机制
    第二章 破骨细胞分化及其功能研究进展
        1. 破骨细胞分化
        2. 破骨细胞骨吸收机制
        3. 镉调控破骨细胞分化的机制
    第三章 Rho GTPases研究进展
        1. Rho GTPases研究进展
        2. Rho GTPases信号通路在破骨细胞分化分化过程中的调控作用
本研究的目的与意义
第二部分 试验研究
    第一章 镉暴露对小鼠骨组织破骨细胞分化的影响
        1 材料
            1.1 试验动物
            1.2 主要试剂
            1.3 主要仪器设备
        2 方法
            2.1 试验溶液配制
            2.2 试验分组与处理
            2.3 小鼠全血、尿液和前肢骨元素含量测定
            2.4 小鼠后肢骨病理组织学变化
            2.5 免疫组化观察小鼠后肢骨OPG、RANKL蛋白的分布和表达
            2.6 ELISA法检测小鼠血清TRACP-5b及E2含量
            2.7 qRT-PCR检测小鼠骨髓细胞中相关蛋白mRNA的表达水平
            2.8 免疫印迹(Western-blot)法检测小鼠骨髓细胞中相关蛋白含量
            2.9 数据分析
        3 结果
            3.1 镉对小鼠体重、采食量的影响
            3.2 小鼠血液、尿液及骨组织镉含量变化
            3.3 镉对小鼠骨相关生化指标的影响
            3.4 镉对小鼠骨骼Ca、P及微量元素含量的影响
            3.5 镉对小鼠骨骼组织学的影响
            3.6 镉对血清OC分化相关指标的影响
            3.7 镉对小鼠骨髓细胞中OC特异性蛋白mRNA表达的影响
            3.8 锡对骨髓细胞OC特异性蛋白及OPG、RANKL蛋白表达的影响
            3.9 镉对骨硬质中RANKL、OPG蛋白的分布及表达量的影响
            3.10 镉对小鼠骨髓细胞中Rho GTPases关键蛋白及其mRNA表达的影响
        4 讨论
    第二章 Rho GTPases信号通路在镉影响破骨细胞分化中的作用研究
        1 材料
            1.1 试验细胞
            1.2 主要试剂
            1.3 主要仪器设备
        2 方法
            2.1 试验溶液配制
            2.2 RAW264.7培养及破骨细胞的诱导分化
            2.3 CCK-8法检测细胞活力
            2.4 破骨细胞TRAP染色
            2.5 免疫荧光法观察细胞骨架
            2.6 Transwell法检测破骨细胞前体细胞迁移能力
            2.7 qRT-PCR测定相关蛋白mRNA水平的表达
            2.8 Western blot测定相关蛋白的表达
            2.9 数据分析
        3 结果
            3.1 镉对破骨细胞分化的影响
            3.2 镉对破骨细胞前体细胞Rho GTPases信号通路的影响
            3.3 镉对破骨细胞Rho GTPases信号通路的影响
        4 讨论
全文结论
参考文献
致谢
攻读学位期间发表的学术论文



本文编号：3768625