薯蓣皂苷对矽尘促发SLE过程中的UNC93B1/TLR7/TLR9信号通路影响的研究
发布时间：2023-05-06 00:16
研究目的:矽肺是最常见和最严重的职业病之一,长期吸入高浓度矽尘即可引起矽肺。研究表明,矽肺的发生会促进如系统性红斑狼疮(SLE)、硬皮病(SSC)等的自身免疫性疾病的发病率升高。其中,SLE为二氧化硅引起的重要的自身免疫性疾病之一。因此探索矽尘促发系统性红斑狼疮的致病机制,寻找其有效的治疗药物是目前亟待解决的任务。研究发现Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)与SLE密切相关,同时许多研究也表明内质网驻留蛋白UNC93B1在自身抗原激活TLR7/TLR9信号通路的过程中扮演着重要角色。因此本研究采用J774A.1小鼠单核细胞和MRL/lpr狼疮倾向小鼠,探讨矽尘和薯蓣皂苷对UNC93B1/TLR7/TLR9信号通路的影响,结合体内外研究探索矽尘促发系统性红斑狼疮的发病机制和薯蓣皂苷对疾病的治疗作用。研究方法:体外实验采用J774A.1细胞,首先给予不同浓度的二氧化硅悬液,刺激不同时间后采用MTS的方法检测细胞增殖活力以确定后续实验应用的二氧化硅浓度和刺激时间;在确定二氧化硅刺激浓度和时间之后,采取相应浓度的二氧化硅悬液刺激细胞,提取蛋白和mRNA,通过Wes...
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
1 前言
2 材料和方法
2.1 主要试剂和仪器
2.1.1 主要试剂
2.1.2 主要仪器
2.2 主要试剂的配置
2.2.1 4 %多聚甲醛固定液
2.2.2 10 ×电泳缓冲液(10×Running Buffer)
2.2.3 10 ×转膜液(10×Trans-Buffer)
2.2.4 10 ×TBS溶液
2.2.5 1 %TBST溶液
2.2.6 封闭液
2.2.7 1 %杂交液
2.2.8 高糖DMEM培养基
2.2.9 APS过硫酸铵溶液
2.2.10 5 ×PBS溶液
2.2.11 10 ×抗原修复液
2.3 研究对象与分组
2.3.1 实验动物及细胞
2.3.2 体外实验分组及细胞刺激
2.3.3 体内实验分组及模型建立
2.4 细胞计数及MTS法检测细胞活力
2.5 炎症因子检测(ELISA)
2.6 小鼠肾组织、脾组织样品的取留
2.7 肾组织六胺银染色(PASM)
2.8 总RNA的提取和Real-Time PCR检测
2.8.1 总RNA的提取
2.8.2 RNA反转录
2.8.3 RT-PCR检测
2.9 BCA法定蛋白及Western Blot检测
2.9.1 BCA法定蛋白
2.9.2 Western Blot检测
2.10 免疫荧光染色(IF)
2.10.1 组织免疫荧光染色
2.10.2 细胞免疫荧光染色
2.11 统计学分析
3 实验结果
3.1 矽尘暴露能够增加J774A.1 细胞UNC93B1 的表达水平
3.1.1 不同时间及浓度的矽尘刺激对细胞活力的影响
3.1.2 矽尘暴露能够增加J774A.1 细胞UNC93B1 的表达水平
3.2 薯蓣皂苷可以降低矽尘刺激引起的J774A.1 细胞UNC93B1 的表达上调
3.3 薯蓣皂苷可以降低由矽尘刺激引起的J774A.1 细胞炎症水平升高
3.4 薯蓣皂苷可以抑制矽尘刺激引起的J774A.1 细胞UNC93B1/TLR7/TLR9 通路的活化
3.4.1 薯蓣皂苷可以抑制矽尘刺激引起的J774A.1 细胞UNC93B1/TLR7 通路的活化
3.4.2 薯蓣皂苷可以抑制矽尘刺激引起的J774A.1 细胞UNC93B1/TLR9 通路的活化
3.5 薯蓣皂苷可以减轻由矽尘促发的狼疮肾炎
3.6 薯蓣皂苷可以降低由矽尘促发的狼疮倾向小鼠脾脏和肾脏UNC93B1 表达升高
3.6.1 薯蓣皂苷可以降低由矽尘促发的狼疮倾向小鼠脾脏UNC93B1 表达升高
3.6.2 薯蓣皂苷可以降低由矽尘促发狼疮倾向小鼠的肾脏UNC93B1 表达升高
3.7 薯蓣皂苷可以抑制由矽尘促发的狼疮倾向小鼠UNC93B1/TLR7/TLR9 通路的活化
3.7.1 薯蓣皂苷可以抑制由矽尘促发的狼疮倾向小鼠UNC93B1/TLR7 通路的活化
3.7.2 薯蓣皂苷可以抑制由矽尘促发的狼疮倾向小鼠UNC93B1/TLR9 通路的活化
4 讨论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历
本文编号：3808645
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
1 前言
2 材料和方法
2.1 主要试剂和仪器
2.1.1 主要试剂
2.1.2 主要仪器
2.2 主要试剂的配置
2.2.1 4 %多聚甲醛固定液
2.2.2 10 ×电泳缓冲液(10×Running Buffer)
2.2.3 10 ×转膜液(10×Trans-Buffer)
2.2.4 10 ×TBS溶液
2.2.5 1 %TBST溶液
2.2.6 封闭液
2.2.7 1 %杂交液
2.2.8 高糖DMEM培养基
2.2.9 APS过硫酸铵溶液
2.2.10 5 ×PBS溶液
2.2.11 10 ×抗原修复液
2.3 研究对象与分组
2.3.1 实验动物及细胞
2.3.2 体外实验分组及细胞刺激
2.3.3 体内实验分组及模型建立
2.4 细胞计数及MTS法检测细胞活力
2.5 炎症因子检测(ELISA)
2.6 小鼠肾组织、脾组织样品的取留
2.7 肾组织六胺银染色(PASM)
2.8 总RNA的提取和Real-Time PCR检测
2.8.1 总RNA的提取
2.8.2 RNA反转录
2.8.3 RT-PCR检测
2.9 BCA法定蛋白及Western Blot检测
2.9.1 BCA法定蛋白
2.9.2 Western Blot检测
2.10 免疫荧光染色(IF)
2.10.1 组织免疫荧光染色
2.10.2 细胞免疫荧光染色
2.11 统计学分析
3 实验结果
3.1 矽尘暴露能够增加J774A.1 细胞UNC93B1 的表达水平
3.1.1 不同时间及浓度的矽尘刺激对细胞活力的影响
3.1.2 矽尘暴露能够增加J774A.1 细胞UNC93B1 的表达水平
3.2 薯蓣皂苷可以降低矽尘刺激引起的J774A.1 细胞UNC93B1 的表达上调
3.3 薯蓣皂苷可以降低由矽尘刺激引起的J774A.1 细胞炎症水平升高
3.4 薯蓣皂苷可以抑制矽尘刺激引起的J774A.1 细胞UNC93B1/TLR7/TLR9 通路的活化
3.4.1 薯蓣皂苷可以抑制矽尘刺激引起的J774A.1 细胞UNC93B1/TLR7 通路的活化
3.4.2 薯蓣皂苷可以抑制矽尘刺激引起的J774A.1 细胞UNC93B1/TLR9 通路的活化
3.5 薯蓣皂苷可以减轻由矽尘促发的狼疮肾炎
3.6 薯蓣皂苷可以降低由矽尘促发的狼疮倾向小鼠脾脏和肾脏UNC93B1 表达升高
3.6.1 薯蓣皂苷可以降低由矽尘促发的狼疮倾向小鼠脾脏UNC93B1 表达升高
3.6.2 薯蓣皂苷可以降低由矽尘促发狼疮倾向小鼠的肾脏UNC93B1 表达升高
3.7 薯蓣皂苷可以抑制由矽尘促发的狼疮倾向小鼠UNC93B1/TLR7/TLR9 通路的活化
3.7.1 薯蓣皂苷可以抑制由矽尘促发的狼疮倾向小鼠UNC93B1/TLR7 通路的活化
3.7.2 薯蓣皂苷可以抑制由矽尘促发的狼疮倾向小鼠UNC93B1/TLR9 通路的活化
4 讨论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
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本文编号：3808645
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