工频磁场诱导小鼠胚胎成纤维细胞ROS相关的自噬

发布时间：2017-05-20 15:21

  本文关键词：工频磁场诱导小鼠胚胎成纤维细胞ROS相关的自噬，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景：工频磁场是指频率为50Hz或60Hz,由各种电压等级输电线及各种家用电器等产生的磁场,其属于极低频电磁场(0-300Hz)的范畴。工频磁场被报道可以改变神经组织的Ca2+的内稳态,引起不同细胞ROS的上升,引起细胞或生物内稳态的改变导致其细胞功能的改变。自噬对维持细胞、组织或生物体的内稳态发挥重要功能。细胞自噬将受损的细胞器或生物大分子包裹进自噬体,与溶酶体结合后降解内容物供机体重新利用,是机体重要的一种防御和保护机制。暴露于工频磁场后,细胞稳态的变化是否会引起细胞发生自噬,以适应这一新的环境目前还未知。 目的：本研究拟探索2mT工频磁场对小鼠胚胎成纤维细胞自噬的影响。 方法：MEF细胞暴露于2mT工频磁场30分钟、2小时、6小时、12小时和24小时后,通过Western blotting实验检测细胞内自噬标志物LC3-Ⅱ表达水平。监测到暴露组自噬标志物增加的时间点后,我们通过激光共聚焦显微镜检测细胞内GFP-LC3定位自噬小体情况,用透射电镜观察细胞内自噬体形成情况,通过添加溶酶体抑制剂氯喹检测自噬流量变化。并且,我们用ROS检测试剂盒测定细胞内ROS水平,用流式细胞仪及TUNEL染色检测细胞凋亡。 结果：在本实验条件下,工频磁场暴露6h可引起MEF细胞自噬标志物水平上升,包括(1)LC3-Ⅱ表达水平升高；(2)GFP-LC3亮点数量增加；(3)自噬小体形成数量增加。另外,通过添加氯喹,我们发现工频磁场辐照6h后自噬流量增加,提示工频磁场诱导的MEF自噬标志物水平上升,是由于上游诱导增加,与自噬降解通路的抑制无关。在探究工频磁场诱导的MEF细胞自噬机制时,我们发现其可能与ROS相关,是非1nTOR依赖的。工频磁场暴露6h对MEF细胞凋亡无影响。 结论：在本实验条件下,工频磁场暴露6h引起MEF细胞ROS相关的自噬。
【关键词】：工频磁场 细胞自噬 ROS 小鼠胚胎成纤维细胞
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R131
【目录】：

• 致谢4-6
• 中文摘要6-8
• abstract8-10
• 缩略语10-12
• 目次12-14
• 1. 前言14-18
• 2. 主要仪器设备、材料与试剂18-23
• 2.1 主要仪器设备和耗材18
• 2.2 细胞及其培养液18-19
• 2.3 主要试剂19-20
• 2.4 试剂配制20-23
• 2.4.1 细胞培养液配制20
• 2.4.2 Western blotting相关试剂配制20-22
• 2.4.3 激光共聚焦实验试剂配制22
• 2.4.4 透射电子显微镜实验相关试剂配制22-23
• 3. 实验方法23-29
• 3.1 sXc-ELF工频磁场辐照系统23-24
• 3.2 细胞培养与分组24
• 3.3 工频磁场对MEF细胞自噬影响的检测24-27
• 3.3.1 Western blotting检测工频磁场对MEF细胞LC3-Ⅱ蛋白表达的影响24-26
• 3.3.2 激光共聚焦焦显微镜观察工频磁场对稳转GFP-LC3 MEF细胞GFP-LC3亮点数的影响26
• 3.3.3 透射电子显微镜观察工频磁场对MEF细胞自噬泡形成的影响26-27
• 3.4 工频磁场对MEF细胞ROS影响的检测27
• 3.5 工频磁场对MEF细胞凋亡影响的检测27-29
• 3.5.1 流式细胞仪检测工频磁场对MEF细胞凋亡的影响27
• 3.5.2 Tunel法检测工频磁场对MEF细胞凋亡的影响27-29
• 4. 实验结果29-39
• 4.1 工频磁场暴露对MEF细胞自噬的影响29-34
• 4.1.1 工频磁场暴露对MEF细胞自噬标志物的表达水平的影响29-32
• 4.1.2 工频磁场暴露对MEF细胞自噬流量的影响32-34
• 4.1.3 工频磁场暴露对MEF细胞p70s6k磷酸化的影响34
• 4.2 工频磁场暴露对MEF细胞ROS水平的影响34-35
• 4.3 工频磁场暴露对MEF细胞凋亡的影响35-39
• 5. 讨论39-41
• 6. 结论41-42
• 参考文献42-48
• 综述48-65
• 参考文献57-65
• 作者简历及在读期间所取得的科研成果65

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 吕琰;宋涛;;电磁场生物效应机制的研究进展[J];科技通报;2013年04期

2 曹学成;宁镭;;极低频磁场生物效应的生物物理机制研究[J];山东农业大学学报(自然科学版);2007年03期

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本文编号：382038