基于等温杂交链式反应及酶联免疫吸附法对李斯特菌的检测

发布时间：2024-03-07 23:57

　　李斯特菌在我们的生活环境下无处不在,并且李斯特菌存在于绝大多数食物食品中。许多国家已经采取了相应的控制措施并制定相应的准则,避免因李斯特菌感染而引起疾病。李斯特菌传统常规的分离培养法、免疫学检测方法耗时长,需要特定的酶催化,检测灵敏性低,而且只适用于实验室检测,因此,我们试图建立李斯特菌新型检测方法,等温、耗时短、不需要酶、不需要专业试验人员操作,适合大众化检测。磁珠结合等温杂交链式反应(Hybridization Chain Reaction,HCR)病原菌检测法:以磁珠为检测平台,利用夹心结构使抓取探针、待检测靶标和检测探针连接,通过HCR信号放大,最后通过连接的HRP酶催化TMB显色,实现肉眼检测的可视化。本方法具有高灵敏性,李斯特菌浓度为3×10⁴ CFU/mL,沙门氏菌最低检测浓度为3×10³ CFU/mL,。磁珠结合纳米花病原菌检测法:PBS缓冲液条件下,二价铜和ConA蛋白制备的纳米花作为转化信号标记物,偶联抗体的磁珠捕获李斯特菌,进一步与纳米花结合,最后通过纳米花释放铜离子促进两条短核酸片段点击化学反应连结,核酸试纸条实现可视...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1.1滚环扩增技术原理

扩增技术[29，30]实现目标检测采用圆形模板和特殊的DNA聚合酶。RCA可分为线性RCA（LRCA）和指数RCA。其实现了在圆形模板放大伸长单引物，从而达到在pM水平的检出限。为提高检测灵敏度，RCA的各种可行方法已被开发，包括指数RCA。该方法是最早使用多....

图1.2双核酸催化组装技术原理图

在常温下、无需辅助酶即可对靶标核酸序列实现信号放大的方法。如图1.2所示，在包括靶标核酸序列和两个功能性发夹结构核酸探针存在的情况下即可发生CHA反应[39,41]。其反应原理是基于碱基互补配对原则，通过设计并合成的探针H1与H2碱基互补，通过温度变化使H1和....

图1.3核酸杂交链式反应原理图

8图1.3核酸杂交链式反应原理图1.3HCR反应信号放大技术的应用HCR反应是一种新型的常温下即可反应的核酸扩增技术，操作过程不需要大型仪器，对环境要求简便，并且耗时短，操作简单不需要高技术人员，且HCR反应过程中无需辅助酶的参与，节约成本，重现性好，实验性强，因此....

图2.1磁珠结合等温杂交链式反应法对病原菌核酸片段检测反应原理图

14图2.1磁珠结合等温杂交链式反应法对病原菌核酸片段检测反应原理图2.1实验材料和仪器2.1.1菌种肠炎沙门氏菌和单增李斯特菌均由本实验室保存。2.1.2主要试剂本实验所有使用的化学试剂没有进行纯化处理，均为分析纯级别。在实验过程中所使用的水都是灭菌的双蒸水，由上海生....

本文编号：3921725